Mycobacterium tuberculosis Antimikrobiyal duyarlılık testi zor ama hasta bakımı için kritik. Bu mikrotiter plate formatı 12 antimikobakteriyel ilaçların test sunar ve uygun tedavi yardımcı olacak minimum inhibitör konsantrasyon (MİK) değerleri sağlar.
Antimikrobiyal direnç hızlı algılama dirençli Mycobacterium tuberculosis (MTB) artışı kontrol etmek için çaba önemlidir. MTB antimikrobiyal duyarlılık testleri (AST), geleneksel oran agar yöntemi veya macrobroth test / BACTEC (Becton Dickinson, Sparks, MD), VersaTREK (TREK Diagnostics, Cleveland, OH) veya BacT gibi bir araç tarafından yapılmıştır ALERT (bioMérieux, Hazelwood, MO). Agar oranı yöntemi olarak kabul ederken, AST "altın" standardı, yoğun emek ve uyuşturucu ücretsiz agar göre uyuşturucu içeren agar üzerinde koloni sayımı yaparak direnç hesaplama gerektirir. Uyuşturucu ücretsiz orta karşılaştırıldığında ilaç içeren orta ≥% 1 büyüme varsa, organizma o ilaca dirençli olarak kabul edilir. Macrobroth yöntemleri enstrümantasyon ve ilk satırı ilaçlar için test kırılma noktası ("kritik") ilaç konsantrasyonları (izoniazid, etambutol, rifampin ve pirazinamid) gerektirir. Burada anlatılan yöntemi 96 mikrotiter plate formatında piyasada bulunan [MYCOTB (TREK Diagnostics)] ve amikasin (her ikisi de ilk (izoniazid, rifampin, etambutol) ve ikinci basamak ilaçlar da dahil olmak üzere, tüberküloz tedavisinde kullanılan 12 antimikrobiyaller artan konsantrasyonlarda içeren, sikloserin, etionamid, kanamisin, moksifloksasin, ofloksasin, para-aminosalisilik asit, rifabutin, ve streptomisin). Pirazinamid, ilk satırı ilaç, asidik test koşulları için ihtiyacı nedeniyle mikrotiter plate dahil değildir. Mikrotiter sistemin avantajları, hem de kurmak kolaylığı ve geleneksel agar oranı (21 gün) ile karşılaştırıldığında daha hızlı dönüş süresi (14 gün) içerir. Buna ek olarak, et suyu ya da katı besiyeri kullanılarak hazırlanan inokulum plaka kurmak olabilir. Mikrotiter plate formatı yeni ve MTB laboratuvar benzersiz güvenlik sorunları beri, bu protokol, güvenli bir şekilde kurulum nasıl anlatacağız bu yana, inkübasyon ve mikrotiter plate okuyun.
Bir AST mikrotiter plate pozitif büyüme kontrolleri bir örnek Şekil 1'de gösterildiği ve uç nokta her ilaç için MIC (mcg / ml) daire. Laboratuvarımızda yapılan bir çalışmada AST mikrotiter plate yöntemi Mycobacterium tuberculosis duyarlılık testi için altın standart agar oranı yöntemi eşdeğer olduğunu belirtti. AST mikrotiter plate ve agar oranı yöntemi 14 ve 21 gün için son yorumu ile geleneksel agar oranı yöntemine göre sonuçların daha hızlı raporlama mikrotiter AST mikrotiter plate ile elde edildi, respectively.The AST mikrotiter plate ilk test avantajı vardır ikinci satırda aynı anda ilaçlara dirençli suşlar ile haddini gecikmeler önlemeye yardımcı olabilir. AST mikrotiter plate de APM daha kurmak ve okumak çok daha kolay ve Vizyonumuz gibi manuel ayna ve yarı otomatik bir sistem plakaları okumak için kullanılır. TB ilaç direnç testi için MIC değeri durumu, özellikle "borderline" duyarlılığı olanlar izolatları için, geleneksel kritik konsantrasyon değerine göre hekimlere değerli yeni bilgiler verebilir.
The authors have nothing to disclose.
Biz çalışma sırasında, yardım ettikleri için Mayo Clinic tüberküloz Laboratuvarı, laboratuvar teknologlar teşekkür etmek istiyorum.
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
---|---|---|
AST microtiter plates and adhesive seal | TREK Diagnostics, Cleveland Ohio | MYCOTB |
McFarland 0.5 standard | TREK Diagnostics, Cleveland, Ohio | E1041 |
Middlebrook 7H10 plates | Fisher | |
Blood Agar Plates | Fisher | |
Sterile loops 1 μL | Fisher | |
Sterile loops 10 μL | Fisher | |
Sensititre Saline-Tween glass bead broth | TREK Diagnostics, Cleveland, Ohio | 27143 |
7H9 OADC Broth | TREK Diagnostics, Cleveland, Ohio | T3440 |
Long Pipet Tips | Fisher | |
Sterile Troughs | TREK Diagnostics, Cleveland, Ohio | |
M. tuberculosis | ATCC | 27294 |
Pipeters: 1000, 200, 20μL | Fisher | |
Tips 1000, 20, 20 μL | Fisher | |
Multichannel Pipetter | Fisher | |
Incubator 5-10% CO2 | Fisher | |
Plastic bags, small, CO2 permeable | Poly Plastic, Delano, PA | |
TB disinfectant (Such as ProSpray C-60) | Certol International, Commerce City, CO | PSC60/32 |
Mirror Box Reader | Fisher |