結核菌の抗菌薬感受性試験は厳しいが、患者のケアのための非常に重要です。このマイクロタイタープレートフォーマットは、12抗マイコバクテリア薬のテストを提供し、適切な治療に役立つだろう最小発育阻止濃度(MIC)値を、提供します。
抗菌剤耐性の迅速な検出は、耐性結核菌(MTB)の増加を制御するための努力に重要です。マウンテンバイクの抗菌薬感受性試験(AST)は伝統的に比率の寒天法によるか、または/バクテック(Becton Dickinson社、スパークス、MD)、VersaTREK(TREK診断、クリーブランド、オハイオ州)またはバクテなどの機器上でmacrobroth試験によって行われているALERT(ビオメリュー、ヘーゼルウッド、ミズーリ)。と考えながら、寒天の割合の方法は、ASTの"ゴールド"スタンダードは、労働集約的であり、薬物のない寒天と比較して薬物含有寒天培地上にコロニー数を実行することで抵抗の計算が必要になります。薬剤を含まない培地と比較して薬物含有培地上≥1%の成長率がある場合は、生物は、その薬剤に耐性と考えられている。 macrobrothメソッドは、最初の行の薬(イソニアジド、エタンブトール、リファンピン、およびピラジナミド)のインスツルメンテーションとテストのブレークポイント("クリティカル")の薬物濃度が必要です。ここで説明する方法では、96ウェルマイクロタイタープレートフォーマットで[MYCOTB(TREKの診断)]市販されており、最初の(イソニアジド、リファンピン、エタンブトール)およびセカンドライン治療薬(アミカシン、両方を含む結核の治療に使用される12抗菌剤の濃度を増加含まれていますサイクロセリン、エチオナミド、カナマイシン、モキシフロキサシン、オフロキサシン、パラアミノサリチル酸、リファブチン、およびストレプトマイシン)。ピラジナミド、最初の行の薬は、酸性試験条件の必要性に起因するマイクロタイタープレートに含まれていません。マイクロシステムの利点は、従来の寒天の割合(21日)と比較して前後の設定と高速ターン(14日)の使いやすさの両方が含まれています。さらに、プレートはブロスまたは固形培地のいずれを用いて調製した接種材料から設定することができます。マイクロタイタープレートフォーマットが新しくなるとマウンテンバイクが研究室で独自の安全性の課題を提示するので、このプロトコルは安全に設定する方法を説明するので、インキュベートし、マイクロタイタープレートをお読みください。
プラス成長のコントロールを持つASTのマイクロタイタープレートの例を図1に示されており、各薬剤のエンドポイントのMIC(μg/ mlの)が円で囲まれている。当研究室で行われた研究では、ASTマイクロタイタープレート法は、 結核菌の感受性試験のためのゴールドスタンダード寒天比例の方式と同等であることが示された。 ASTマイクロタイタープレートと寒天の割合の方法14時と21日間の最終的な解釈と伝統的な寒天の割合の方式と比較した場合、結果の迅速な報告がマイクロタイターASTマイクロタイタープレートで得られた、respectively.The ASTマイクロタイタープレートは、最初のテストの利点を有しており、耐性菌との過度の遅延を防ぐことができます同時にセカンドラインの薬剤。 ASTマイクロタイタープレートには、APMよりもセットアップや読みする方がはるかに簡単ですし、そのようなVIZION、手動ミラーと半自動化システムの両方は、プレートを読み取るために使用することができます。結核の薬剤耐性検査のMIC値の可用性は、特に"ボーダーライン"感受性とのそれらの分離株については、従来の臨界濃度の値に対する相対医師に有益な新しい情報を提供することがあります。
The authors have nothing to disclose.
私たちは、試験期間中に彼らの助けのためにメイヨークリニックMycobacteriology研究室の検査技師に感謝いたします。
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
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AST microtiter plates and adhesive seal | TREK Diagnostics, Cleveland Ohio | MYCOTB |
McFarland 0.5 standard | TREK Diagnostics, Cleveland, Ohio | E1041 |
Middlebrook 7H10 plates | Fisher | |
Blood Agar Plates | Fisher | |
Sterile loops 1 μL | Fisher | |
Sterile loops 10 μL | Fisher | |
Sensititre Saline-Tween glass bead broth | TREK Diagnostics, Cleveland, Ohio | 27143 |
7H9 OADC Broth | TREK Diagnostics, Cleveland, Ohio | T3440 |
Long Pipet Tips | Fisher | |
Sterile Troughs | TREK Diagnostics, Cleveland, Ohio | |
M. tuberculosis | ATCC | 27294 |
Pipeters: 1000, 200, 20μL | Fisher | |
Tips 1000, 20, 20 μL | Fisher | |
Multichannel Pipetter | Fisher | |
Incubator 5-10% CO2 | Fisher | |
Plastic bags, small, CO2 permeable | Poly Plastic, Delano, PA | |
TB disinfectant (Such as ProSpray C-60) | Certol International, Commerce City, CO | PSC60/32 |
Mirror Box Reader | Fisher |