اختبار الحساسية للمضادات الميكروبات من المتفطرة السل يشكل تحديا لكنها حاسمة لرعاية المرضى. هذا الشكل لوحة microtiter يقدم اختبار مضاد المتفطرات 12 المخدرات ويوفر الحد الأدنى من تركيز المثبطة (MIC) القيم ، والتي سوف تساعد في العلاج المناسب.
الكشف السريع عن مقاومة الجراثيم للأدوية مهم في الجهود الرامية إلى السيطرة على زيادة انتشار السل المقاوم للالمتفطرة (MTB). وقد جرت العادة على إجراء اختبارات الحساسية للمضادات الميكروبات (AST) من MTB يؤديها أغار الطريقة من نسبة أو عن طريق اختبار macrobroth على صك مثل BACTEC (بيكتون ديكنسون ، سباركس ، MD) ، VersaTREK (TREK تشخيص ، كليفلاند ، أوهايو) أو جرثومة / ALERT (bioMérieux ، Hazelwood ، MO). الأسلوب نسبة آغار ، في حين تعتبر "الذهب" معيار AST ، هو العمل المكثف ويتطلب حساب المقاومة عن طريق إجراء تعداد المستعمرة المحتوية على أجار المخدرات بالمقارنة مع أجار خالية من المخدرات. إذا كان هناك نمو ≥ 1 ٪ على المدى المتوسط التي تحتوي على المخدرات بالمقارنة مع المتوسط خال من المخدرات ، ويعتبر الكائن مقاومة لهذا الدواء. أساليب القياس وmacrobroth تتطلب اختبار نقطة فاصل ("حرجة") تركيزات المخدرات للأدوية الخط الأول (أيزونيازيد ، الإيثامبوتول ، ريفامبين ، وبيرازيناميد). وصف الأسلوب هنا هو متاح تجاريا في 96 لوحة تنسيق جيد microtiter [MYCOTB (TREK تشخيص)] ، ويحتوي على تركيزات متزايدة من 12 مضادات الميكروبات المستخدمة لعلاج السل بما في ذلك على حد سواء الأولى (أيزونيازيد ، ريفامبين ، الإيثامبوتول) وأدوية الخط الثاني (الأميكاسين ، سيكلوسيرين ، إيثيوناميد ، الكانامايسين ، موكسيفلوكساسين ، أوفلوكساسين ، شبه أمينوساليسيليك حامض ، rifabutin ، والستربتوميسين). بيرازيناميد ، لا يتم تضمين دواء السطر الأول ، في لوحة microtiter نظرا لحاجتها لظروف اختبار الحمضية. مزايا النظام microtiter تشمل كلا من سهولة انشاء وأسرع بدوره حول الوقت (14 يوما) مقارنة مع نسبة آغار التقليدية (21 يوما). بالإضافة ، يمكن تعيين ما يصل من لوحة قيحة أعدت باستخدام مرق أو متوسطة الصلبة. منذ شكل لوحة microtiter هو جديد ومنذ MTB تحديات سلامة فريدة من نوعها في المختبرات ، وهذا البروتوكول سوف تصف كيفية الإعداد بأمان ، واحتضان وقراءة لوحة microtiter.
ويرد مثال لوحة microtiter AST الذي يتحكم نمو إيجابية في الشكل 1 ، وحلقت فوق نقطة النهاية MIC (ميكروغرام / مل) عن كل دواء. وأشارت دراسة أجريت في المختبر لدينا أن لوحة microtiter AST الأسلوب هو ما يعادل الذهب القياسية آغار طريقة لاختبار نسبة التعرض لمرض السل المتفطرة. وتم الحصول على نتائج أسرع التقارير مع لوحة microtiter microtiter AST بالمقارنة مع نسبة أغار الطريقة التقليدية مع التفسير النهائي للوحة microtiter AST وأغار على طريقة نسبة 14 و 21 يوما ، لوحة respectively.The microtiter AST في الاستفادة من التجارب الأولى و عقاقير الخط الثاني في وقت واحد والتي يمكن أن تساعد على منع التأخير المفرط مع السلالات المقاومة للعقاقير. لوحة microtiter AST هو أيضا أسهل بكثير لإعداد وقراءة من الألغام المضادة للأفراد ، ويمكن استخدامها على حد سواء مرآة اليدوي ونظام شبه الآلي مثل VIZION لقراءة لوحات. قد توفر قيمة MIC لاختبار السل مقاومة تقديم معلومات جديدة وقيمة للأطباء النسبي لقيمة تركيز الحرجة التقليدية ، وخصوصا بالنسبة لأولئك مع حساسية العزلات "الشريط الحدودي".
The authors have nothing to disclose.
نود أن نشكر التكنولوجيين مختبر لمختبر عيادة مايو كلينيك Mycobacteriology لما قدموه من مساعدة أثناء الدراسة.
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
---|---|---|
AST microtiter plates and adhesive seal | TREK Diagnostics, Cleveland Ohio | MYCOTB |
McFarland 0.5 standard | TREK Diagnostics, Cleveland, Ohio | E1041 |
Middlebrook 7H10 plates | Fisher | |
Blood Agar Plates | Fisher | |
Sterile loops 1 μL | Fisher | |
Sterile loops 10 μL | Fisher | |
Sensititre Saline-Tween glass bead broth | TREK Diagnostics, Cleveland, Ohio | 27143 |
7H9 OADC Broth | TREK Diagnostics, Cleveland, Ohio | T3440 |
Long Pipet Tips | Fisher | |
Sterile Troughs | TREK Diagnostics, Cleveland, Ohio | |
M. tuberculosis | ATCC | 27294 |
Pipeters: 1000, 200, 20μL | Fisher | |
Tips 1000, 20, 20 μL | Fisher | |
Multichannel Pipetter | Fisher | |
Incubator 5-10% CO2 | Fisher | |
Plastic bags, small, CO2 permeable | Poly Plastic, Delano, PA | |
TB disinfectant (Such as ProSpray C-60) | Certol International, Commerce City, CO | PSC60/32 |
Mirror Box Reader | Fisher |