Чувствительности к антимикробным препаратам микобактерий туберкулеза является сложным, но решающее значение для лечения пациентов. Этот формат планшет предлагает тестирование 12 антимикобактериальными наркотиков и обеспечивает минимальные концентрации тормозных (MIC) ценности, которые помогут в соответствующее лечение.
Быстрого выявления устойчивости к противомикробным препаратам играет важную роль в усилиях по борьбе с увеличением числа резистентных микобактерий туберкулеза (МТБ). Чувствительности к антимикробным препаратам (АСТ) МТБ традиционно выполняемых агар методом доли или macrobroth тестирование на такой инструмент, как BACTEC (Becton Dickinson, Sparks, MD), VersaTREK (TREK Диагностика, Кливленд, Огайо) или BACT / ALERT (bioMérieux, Хазелвуд, МО). Метод агар долю, в то время считается «золотым» стандартом АСТ, является трудоемким и требует расчета сопротивления, выполняя колонии рассчитывает на наркосодержащих агара по сравнению с свободной от наркотиков агара. Если есть ≥ 1% роста на наркосодержащих среду по сравнению со свободной от наркотиков среды, организма, считается, что устойчивые к препарату. Macrobroth методы требуют аппаратура и испытательное точки останова ("критический") концентрации препарата на препараты первого ряда (изониазид, этамбутол, рифампицин и пиразинамид). Метод, описанный здесь, является коммерчески доступным в 96 формате планшет [MYCOTB (TREK Diagnostics)] и содержит возрастающих концентрациях 12 противомикробные препараты используются для лечения туберкулеза, в том числе и первый (изониазид, рифампицин, этамбутол) и препаратов второго ряда (амикацин, циклосерин, этионамид, канамицин, моксифлоксацин, офлоксацин, пара-аминосалициловой кислоты, рифабутин, и стрептомицин). Пиразинамид, первый препарат линию, не входит в планшет из-за его необходимость кислых условиях испытаний. Преимущества микротитровальных системы включают в себя как простота настройки и быстрее поворачиваться времени (14 дней) по сравнению с традиционными доля агар (21 дней). Кроме того, пластина может быть установлена в пределах от посевной подготовлено с использованием либо бульона или твердой среде. Так как формат планшет является новым и так МТБ представляет уникальные вызовы безопасности в лаборатории, этот протокол будет описывать, как безопасно установки, инкубировать и читать планшет.
Примером пластины АСТ микротитровальных, что имеет положительное контролирует рост показан на рисунке 1 и конечной точки MIC (мкг / мл) для каждого лекарства окружен. Исследование, проведенное в нашей лаборатории показали, что пластины АСТ микротитровальных метод эквивалентен золотым стандартом метод доля агар для определения чувствительности микобактерий туберкулеза. Быстрее представление результатов был получен с планшет АСТ микротитровальных по сравнению с традиционным методом доля агар с окончательной интерпретации АСТ планшет и метод агар долю на уровне 14 и 21 дней, respectively.The АСТ планшет имеет преимущество тестирования первого и препаратов второго ряда одновременно, что может помочь предотвратить чрезмерные задержки с резистентными штаммами. Пластины АСТ микротитровальных и намного проще в настройке и читать, чем APM и оба ручной зеркало и полуавтоматические системы, такие как Vizion может быть использован для чтения пластин. Наличие микрофона значение ТБ тестирования лекарственной устойчивости может дать новую ценную информацию для врачей по отношению к традиционным критического значения концентрации, особенно для тех, кто изолирует с "пограничными" восприимчивости.
The authors have nothing to disclose.
Мы хотели бы поблагодарить лабораторию технологов клиники Майо микобактериологию лаборатории за помощь во время исследования.
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
---|---|---|
AST microtiter plates and adhesive seal | TREK Diagnostics, Cleveland Ohio | MYCOTB |
McFarland 0.5 standard | TREK Diagnostics, Cleveland, Ohio | E1041 |
Middlebrook 7H10 plates | Fisher | |
Blood Agar Plates | Fisher | |
Sterile loops 1 μL | Fisher | |
Sterile loops 10 μL | Fisher | |
Sensititre Saline-Tween glass bead broth | TREK Diagnostics, Cleveland, Ohio | 27143 |
7H9 OADC Broth | TREK Diagnostics, Cleveland, Ohio | T3440 |
Long Pipet Tips | Fisher | |
Sterile Troughs | TREK Diagnostics, Cleveland, Ohio | |
M. tuberculosis | ATCC | 27294 |
Pipeters: 1000, 200, 20μL | Fisher | |
Tips 1000, 20, 20 μL | Fisher | |
Multichannel Pipetter | Fisher | |
Incubator 5-10% CO2 | Fisher | |
Plastic bags, small, CO2 permeable | Poly Plastic, Delano, PA | |
TB disinfectant (Such as ProSpray C-60) | Certol International, Commerce City, CO | PSC60/32 |
Mirror Box Reader | Fisher |