Pruebas de susceptibilidad antimicrobiana de Mycobacterium tuberculosis es difícil, pero fundamental para el cuidado del paciente. Este formato de placa de microtitulación ofrece la prueba de 12 medicamentos antimicobacterianos y proporciona la concentración inhibitoria mínima (CIM) los valores, que ayudará en el tratamiento adecuado.
La rápida detección de resistencia a los antimicrobianos es importante en el esfuerzo por controlar el aumento de la resistencia de Mycobacterium tuberculosis (Mtb). Pruebas de susceptibilidad antimicrobiana (AST) de Mtb tradicionalmente ha sido realizado por el método de la proporción de agar o las pruebas macrobroth en un instrumento como el BACTEC (Becton Dickinson, Sparks, MD), VersaTREK (Diagnóstico TREK, Cleveland, OH) o BacT / ALERT (bioMérieux, Hazelwood, MO). El método de proporción de agar, mientras que considera el "gold" estándar de AST, es un trabajo intensivo y requiere el cálculo de la resistencia mediante la realización de recuentos de colonias en agar que contiene el fármaco en comparación con el agar libre de drogas. Si hay crecimiento de ≥ 1% en el medio que contiene el fármaco en comparación con la droga libre de soporte, el microorganismo se considera resistente a ese medicamento. Los métodos macrobroth requieren instrumentación y el punto de prueba de ruptura ("crítica"), las concentraciones de drogas para los medicamentos de primera línea (isoniazida, etambutol, rifampicina y pirazinamida). El método descrito aquí está comercialmente disponible en un formato de 96 pocillos de microtitulación [MYCOTB (Diagnóstico TREK)] y contiene concentraciones crecientes de 12 de los antimicrobianos utilizados para el tratamiento de la tuberculosis entre los dos primeros (isoniacida, rifampicina, etambutol) y medicamentos de segunda línea (amikacina, cicloserina, etionamida, kanamicina, moxifloxacina, ofloxacino, ácido para-aminosalicílico, la rifabutina y estreptomicina). Pirazinamida, un fármaco de primera línea, no está incluido en la placa de microtitulación, debido a su necesidad de condiciones de la prueba ácida. Ventajas del sistema de microtitulación incluyen tanto la facilidad de instalar y más rápido tiempo de vuelta (14 días) en comparación con la proporción de agar tradicional (21 días). Además, la placa se puede configurar de inóculo preparado utilizando caldo o medio sólido. Dado que el formato de placa de microtitulación es nuevo y ya Mtb presenta retos únicos de seguridad en el laboratorio, este protocolo se describe cómo configurar de forma segura, incubar y leer la placa de microtitulación.
Un ejemplo de una placa de microtitulación AST que tiene controles de crecimiento positivo se muestra en la Figura 1 y el MIC final (g / ml) para cada droga es un círculo. Un estudio realizado en nuestro laboratorio indican que el método de la placa de microtitulación de AST es equivalente a la proporción de oro método estándar de agar para determinar la susceptibilidad de Mycobacterium tuberculosis. Más rápida presentación de los resultados se obtuvo con microtiter AST placa de microtitulación en comparación con el método de agar proporción tradicional con la interpretación final de AST microplaca y el método de proporción de agar a 14 y 21 días, respectivamente.El AST microplaca tiene la ventaja de la primera prueba y medicamentos de segunda línea al mismo tiempo que puede ayudar a prevenir demoras excesivas con cepas resistentes. La placa de microtitulación de AST es mucho más fácil de configurar y leer que la APM y los dos un espejo manual y un sistema semi-automático, como el Vizion se puede utilizar para leer las placas. La disponibilidad de un valor de MIC para probar la resistencia a los medicamentos antituberculosos pueden proporcionar información nueva y valiosa a los médicos en relación con el valor de la concentración crítica tradicional, especialmente para aquellos aislados con "límite" la susceptibilidad.
The authors have nothing to disclose.
Nos gustaría agradecer a los técnicos de laboratorio de la Clínica Mayo Micobacteriología laboratorio por su ayuda durante el estudio.
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
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AST microtiter plates and adhesive seal | TREK Diagnostics, Cleveland Ohio | MYCOTB |
McFarland 0.5 standard | TREK Diagnostics, Cleveland, Ohio | E1041 |
Middlebrook 7H10 plates | Fisher | |
Blood Agar Plates | Fisher | |
Sterile loops 1 μL | Fisher | |
Sterile loops 10 μL | Fisher | |
Sensititre Saline-Tween glass bead broth | TREK Diagnostics, Cleveland, Ohio | 27143 |
7H9 OADC Broth | TREK Diagnostics, Cleveland, Ohio | T3440 |
Long Pipet Tips | Fisher | |
Sterile Troughs | TREK Diagnostics, Cleveland, Ohio | |
M. tuberculosis | ATCC | 27294 |
Pipeters: 1000, 200, 20μL | Fisher | |
Tips 1000, 20, 20 μL | Fisher | |
Multichannel Pipetter | Fisher | |
Incubator 5-10% CO2 | Fisher | |
Plastic bags, small, CO2 permeable | Poly Plastic, Delano, PA | |
TB disinfectant (Such as ProSpray C-60) | Certol International, Commerce City, CO | PSC60/32 |
Mirror Box Reader | Fisher |