تصف هذه المخطوطة بروتوكولا لتحديد ما إذا كان التعرض للأوزون ، وهو معيار من ملوثات الهواء ، يضعف الضامة السنخيه الافيروسيتوسيسه في الجسم المجري. يستخدم هذا البروتوكول الكواشف والتقنيات المستخدمة بشكل شائع ويمكن تكييفها مع نماذج متعددة من الإصابات الرئوية لتحديد الآثار علي افيروسيتوسيس الضامة السنخيه.
الأوزون (O3) هو معيار ملوث الهواء الذي يفاقم ويزيد من حدوث الامراض الرئوية المزمنة. ومن المعروف O3 التعرض للحث علي التهاب رئوي ، ولكن يعرف القليل بشان كيفيه التعرض يغير العمليات الهامه لحل التهاب. افيروسيتوسيس هو عمليه القرار ، حيث الضامة الخلايا ابوتوتيك. الغرض من هذا البروتوكول هو قياس الضامة السنخيه افيروسيتوسيس بعد O3-الناجمة عن أصابه الرئة والتهاب. وقد وصفت عده طرق لقياس الافيروسيتوسيس ؛ ومع ذلك ، معظم تتطلب التلاعب السابقين الجسم الآخر. وصفت بالتفصيل هنا هو بروتوكول لقياس في الجسم الضام السنخيه افيروسيتوسيس 24 ح بعد O3 التعرض ، الذي يتجنب التلاعب الجسم السابق من الضامة وبمثابه تقنيه بسيطه التي يمكن استخدامها لتمثيل بدقه الاضطرابات في عمليه الحل هذه. البروتوكول هو طريقه غير مكثفه من الناحية الفنية وغير مكلفه نسبيا التي تنطوي علي الجسم كله O3 استنشاق متبوعا بلعوم الطموح من الخلايا ابوتوتيك (اي خلايا T jurkat) بينما تحت التخدير العام. ثم يقاس افيروسيتوسيس الضامة السنخيه بتقييم المجهري الخفيفة من الضامة التي تم جمعها من غسل البرونزية (BAL). يتم قياس افيروسيتوسيس أخيرا عن طريق حساب مؤشر افيروسيتيك. وبشكل جماعي ، فان الطرق المبينة تحدد النشاط افيروسيتيك في الرئة في الجسم المجري بينما تعمل أيضا علي تحليل الآثار الصحية السلبية لل O3 أو الشتائم المستنشقة الأخرى.
تتعرض الرئة باستمرار إلى الإهانات البيئية ، بما في ذلك الجسيمات الهوائية ، والفيروسات ، والبكتيريا ، والغازات المؤكسدة التي تؤدي إلى التهاب رئوي1،2،3. هذه الإهانات يمكن ان تضر تبادل الغاز والحثعلي أصابه الانسجه لا رجعه فيه 4,5. الضامة السنخيه ، التي تشكل حوالي 95 ٪ من الخلايا المناعية الموجودة في murine والرئتين البشرية في التوازن ، هي المنظمين الحرجة من التهاب رئوي بعد الإهانات البيئية1،2، 3،4،5. الضامة السنخيه ضرورية خلال الدفاع المضيف عن طريق التخدير والقضاء علي مسببات الامراض. في الاونه الاخيره ، وقد ثبت الضامة السنخيه لتعزيز التوازن الانسجه وحل التهاب من خلال افيروسيتوسيس6،7. افيروسيتوسيس هو عمليه الفاجريه التي تبتلع الضامة والقضاء علي خلايا ابوتوتيك8،9،10. افيروسيتوسيس أيضا نتائج في إنتاج وسطاء (اي ، آيل-10 ، tgf-β ، pge2، وأكسيد النيتريك) التي تزيد من زيادة العملية ، مما ادي إلى حل التهابات9،10،11 و12و16و18. هذه العملية ضرورية لمنع النخر الثانوي وتعزيز التوازن الانسجه12,13,14. وقد ربطت العديد من الدراسات ضعف الافيروسيتوسيس مع مختلف امراض الرئة المزمنة, بما في ذلك الربو, مرض الانسداد الرئوي المزمن, والتليف الرئوي مجهول العلة8,9,15, 16و17.
O3 هو معيار الملوثات الجوية التي تفاقم ويزيد من الاصابه بامراض الرئة المزمنة19،20،21. O3 يستحث التهاب الرئة والاصابه ، ومن المعروف ان يضعف الضامة السنخيه من مسببات الامراض البكتيرية22،23. ومع ذلك ، فمن غير المعروف ما إذا كان O3 يضعف الضامة السنخيه افيروسيتوسيس. التحقيق O3-التي يسببها التعديلات في افيروسيتوسيس الضامة السنخيه سوف توفر البصيرة المحتملة في كيفيه التعرض يمكن ان يؤدي إلى حدوث امراض الرئة المزمنة وتفاقم. ويرد أدناه طريقه بسيطه لتقييم الضامة السنخيه افيروسيتوسيس في رئتي الفئران الإناث بعد التعرض الحاد O3 .
الأسلوب المبينة posseses العديد من المزايا علي بروتوكولات افيروسيتوسيس الأخرى التي يشيع استخدامها في الميدان عن طريق القضاء علي استخدام الاصباغ الفلورية مكلفه, قياسات تدفق واسعه النطاق الخلوي, والتلاعب السابقة الجسم الضام من السنخيه24 ،25. بالاضافه إلى ذلك ، يقيس هذا البروتوكول افيروسيتوسيس الضامة السنخيه في سياق البيئة المجهرية الرئة ، والتي يمكن ان تؤثر علي وظيفة الضامة.
افيروسيتوسيس هو عمليه مضاده للالتهابات التي الضامة واضحة خلايا ابوتوتيك والحطام ، فضلا عن إنتاج متعددة الوسطاء المضادة للالتهابات9،10،11،12،16 ،18. وقد قدمت نماذج متعددة من افيروسيت?…
The authors have nothing to disclose.
يتم تمويل هذه الدراسة من قبل معهد الآثار الصحية والتر ا. روزنبليث جائزه و NIEHS R01ES028829 (إلى k. m. G). ونود ان نشكر الدكتورة ديان والترز (قسم فسيولوجيا ، ECU) لمساعدتها في الحصول علي صور تمثيليه من الضامة السنخيه.
Annexin V-FITC Kit | Trevigen | 4830-250-K | The TACS Annexin V-FITC Kit allows rapid, specific, and quantitative identification of apoptosis in individual cells when using flow cytometry. |
BCL2 Jurkat T Cells | ATCC | ATCC CRL-2899 | The BCL2 Jurkat cell line was derived by transfecting human Jurkat T cells with the pSFFV-neo mammalian expression vector containing the human BCL-2 ORF insert and a neomycin-resistant gene. Has been for models of measuring efferocytosis. |
Countess II Automated Cell Counter | Thermofisher | AMQAX1000 | It is a benchtop assay platform equipped with state-of-the-art optics, full autofocus, and image analysis software for rapid assessment of cells in suspension. Very easy to use. |
Cytospin 4 Cytocentrifuge | Thermofisher | A78300003 | Provides economical thin-layer preparations from any liquid matrix, especially hypocellular fluids such as bronchoalveolar lavage fluid. |
Fetal Bovine Serum, qualified, heat inactivated | Thermofisher | 16140071 | Provides Nutrients to cultured cells for them to grow. It is standard for cell culture. |
Kwik-Diff Reagent 2, Eosin | Thermofisher | 9990706 | Eosin staining that stains cytoplasm. |
Kwik-Diff Reagent 1, Fixative | Thermofisher | 9990705 | Fixes cells to be stained by H&E. |
Kwik-Diff Reagent 3, Methylene Blue | Thermofisher | 9990707 | Methylene Blue staining that stains the nucleus. |
Penicillin-Streptomycin | Sigma/Aldrich | P0781-100ML | Penicillin-Streptomycin is the most commonly used antibiotic solution for culture of mammalian cells. Additionally it is used to maintain sterile conditions during cell culture. |
RPMI 1640 Medium, GlutaMAX Supplement | Thermofisher | 61870036 | RPMI 1640 Medium (Roswell Park Memorial Institute 1640 Medium) was originally developed to culture human leukemic cells in suspension and as a monolayer. RPMI 1640 medium has since been found suitable for a variety of mammalian cells, including HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocytes, and carcinomas. Helps grow Jurkat T cells fast and efficiently. |
Stratagene UV Stratalinker 1800 UV Crosslinker | Cambridge Scientific | 16659 | The Stratalinker UV crosslinker is designed to induce apoptosis, crosslink DNA or RNA to nylon, nitrocellulose, or nylon-reinforced nitrocellulose membranes. |
Teledyne T400 ultraviolet light photometer | Teledyne API | T400 | The Model T400 UV Absorption analyzer uses a system based on the Beer-Lambert law for measuring low ranges of ozone in ambient air. |
Teledyne T703 Ozone calibrator | Teledyne API | T703 | Provides feedback control of the UV lamp intensity, assuring stable ozone output. |