تمثل هذه المقالة الاختبار المفيد في المختبر لتقييم قدرة المتوسطة المشروطة من الخلايا السرطانية لجذب الضامة.
تمثل الضامة المرتبطة بالورم (TAMs) نسبة كبيرة من الخلايا في كتلة الورم لأنواع مختلفة من السرطانات. الورم الأرومي الدبقي (GBM)، ورم خبيث في الدماغ مع عدم وجود علاج، لديه ما يصل إلى نصف TAMs كتلة الورم. يمكن أن تكون TAMs موالية للورم أو مضادة للورم، اعتماداً على تنشيط جينات محددة في الخلايا. الطفرات الوراثية في الأورام، من خلال تنظيم التعبير السيتوكين، يمكن أن تؤثر على توظيف TAMs إلى البيئة الدقيقة الورم. هنا، ونحن نصف دراسة كمية على أساس الخلية لتقييم توظيف الضامة من قبل وسيلة مكيفة من الخلايا السرطانية. يستخدم هذا التقييم خط الخلايا الضامة البشرية MV-4-11 لدراسة جاذبية الضامة بواسطة الوسيط المشروط من الورم الأرومي الدبقي، مما يسمح باستنساخ عالية وتقلب منخفض. البيانات التي تم إنشاؤها مع هذا الفحص يمكن أن تسهم في فهم أفضل للتفاعل بين الورم والبيئة الدقيقة الورم. ويمكن استخدام فحص مماثل لتقييم التفاعل بين الخلايا السرطانية والخلايا المناعية الأخرى، بما في ذلك الخلايا T والخلايا القاتلة الطبيعية (NK).
الضامة هي خلايا مناعية مع الفينوتيبيك عالية وغير متجانسة وظيفية1. أنها تلعب أدوارا هامة في أنظمة الدفاع المضيف, إصلاح الأنسجة, التنمية وتطور الورم1. TAMs هي الضامة في البيئة الدقيقة للأورام الصلبة. يمكن لبعض TAMs تعزيز نمو الورم من خلال تثبيط T الخلية بوساطة النشاط السامة للخلايا، تحوير البيئة الدقيقة الورم (TME)، وتعزيز تكوين الأوعية الدموية، والغزو والانبثاث2،3،4، 5.TAMs هي من بين أنواع الخلايا الأكثر وفرة في TME وعدد أكبر من TAMs يرتبط عموما مع أسوأ بقاء المريض في العديد من أنواع الأورام الصلبة6. التواقيع الوراثية المتميزة للخلايا السرطانية تؤثر على قدرتها على تجنيد الضامة. في GBM، ورم الدماغ العدوانية مع عدم وجود علاج، الضامة يمكن أن تمثل ما يصل إلى نصف كتلة الورم7. التضخيم المشترك لمستقبلات عامل نمو البشرة(EGFR)وكهربة متحولة EGFRvIII كثيرا ما لوحظ في GBM، الذي يمنح مزايا نمو الورم8. الخلايا المشتركة التعبير EGFR وEGFRvIII جذب المزيد من الضامة مقارنة مع الخلايا التي تعبر عن EGFR أو EGFRvIII singly7.
Chemokines هي عائلة من السيتوكينات الصغيرة التي تلعب أدوارا هامة في تنظيم تكوين المناعة في TME6،9. الخلايا البشرية تعبر عن أكثر من 50 السيتوكينات10. ويتحقق التسلل المناعي في الأورام إلى حد كبير عن طريق التفاعل بين السيتوكينات ومستقبلات السيتوكين11. كل نوع من الخلايا المناعية يعبر عن مستقبلات chemokine متميزة / chemokines ويمكن تجنيدها من قبل الخلايا التي تفرز مستقبلات chemokines محددة / chemokine12. الخلايا السرطانية يمكن أن تزيد من التعبير عن بعض chemokines لتجنيد الخلايا المناعية مثل TAMs، والخلايا T التنظيمية والخلايا المثبطة المشتقة من اليميلويد (MDSCs)6. الحصار من chemokine محددة تفرزها الأورام يمكن أن يكون وسيلة واعدة في تثبيط تسلل الخلايا المناعية إلى كتلة الورم.
هنا، ونحن نصف بروتوكول يسمح في المختبر تقييم التفاعل بين الورم والضامة، وذلك باستخدام وسائل الإعلام مشروطة من الخلايا السرطانية التي تحتوي على chemokines وخطوط الخلايا الضامة.
في هذا البروتوكول، هناك عدة خطوات رئيسية: 1) تحديد إدراج Transwell. لMV-4-11 خط الخلية، 5 ميكرومتر Transwell إدراج العمل بشكل جيد. ومع ذلك، بالنسبة لخطوط الخلايا الأخرى مثل خط الخلايا الأحادية الشائعة الاستخدام THP-1، قد يعمل حجم مسام مختلف بشكل أفضل. 2) كما تنمو خطوط الخلايا المختلفة بسرعات مختلفة، من الم?…
The authors have nothing to disclose.
دعم المنح: Z. تلقى الدعم من مؤسسة أليكس موقف عصير الليمون، الجمعية الأمريكية لأورام الدماغ، المعاهد القومية للصحة T32CA108462 وبرنامج للبحوث الطبية الحيوية اختراق، والتي يتم تمويلها جزئيا من قبل مؤسسة ساندلر. W. Weiss كان مدعوما من قبل منح المعاهد الوطنية للصحة R01CA221969, R01NS091620, P50CA097257, U01CA217864, P30CA82103; مؤسسة صموئيل ج. واكسمان لبحوث السرطان؛ وإيفيلين وماتي أندرسون كرسي.
0.1 μm filtration cup | Thermo fisher | 566-0010 | |
0.45 μm filter unit | Millipore | SLHA033SS | |
10 mL serological pipettes | Olympus plastics | 12-104 | |
15mL sterile centrifuge tubes | Olympus plastics | 28-103 | |
1 mL pipette tip | ART molecular bioproducts | 2779-RI | |
2 mL aspirating pipet | Falcon | 357558 | |
24-well plate | Millipore | ECM507 | Part of ECM507, or can be purchased separately |
4x lysis buffer | Millipore | ECM507 | Part of ECM507, or can be purchased separately |
5 μm Transwell insert | Millipore | ECM507 | Part of ECM507, or can be purchased separately |
75cm2 flask | Corning | 430641U | |
Accutase | Innovative cell technologies | AT-104 | |
B27 | Gibco | 12587-010 | |
CyQuant Dye | Millipore | ECM507 | Part of ECM507, or can be purchased separately |
DMEM | Gibco | 11965-092 | |
DMEM:F12 | Gibco | 10565-018 | |
EGF | Peprotech | AF-100-15 | |
FBS | Gibco | 26140 | |
FGF | Peprotech | 100-18B | |
IMDM | Gibco | 12440-053 | |
PBS | Gibco | 14190-144 | |
Pen Strep | Gibco | 15140-122 | |
Trypan blue | Biorad | 1450021 |