İlköğretim İnsan Keratinositler gelen Organotipik Radye Kültürlerin Üretimi
Summary
Bir<em> In vitro</emTaklit etmek> yöntemi<em> In vivo</em> Epitelyal farklılaşma tarif edilmektedir. Birçok virüs bulaşıcı yaşam döngüsünün bir parçası olarak epitel hücreleri hedef ve bu yöntem, virüsün incelenmesi için bir araç sağlar: konak etkileşimleri daha yakından oluştuğu benzediği<em> In vivo</em>. Bu tekniğin temel keratinositler, oluşturulan hücre çizgileri, aynı zamanda, normal veya hastalıklı biyopsi doku ile birlikte kullanılabilir.
Abstract
Organotipik epitel sal kültürlerin gelişimi vitro sistemde sadakatle özetlediği epitel farklılaşmasında etkili olan araştırmacılar sağlamıştır. Bu sistem için bir çok kullanıma vardır. Örneğin, keratinositlerin üç boyutlu organotipik sal kültürleri yetiştirme yeteneğiyle, insan papilloma virüsü (HPV) 1 çalışmalarında önemli bir kilometre taşı olmuştur. HPV yaşam döngüsü sıkıca skuamöz epitel 2 farklılaşma bağlantılıdır. Olarak Organotipik epitel sal kültürler burada virüs üretimi 3,4,5 dahil olmak üzere, tüm papillomavirus yaşam döngüsü yeniden gösterdi. Ayrıca, bu sal kültürler HPV ile in vivo enfeksiyon üzerine görülenlere benzerdir displastik lezyonlar gösterirler. Böylece bu sistem, aynı zamanda epitel hücre kanserleri, yanı sıra genel olarak epitel hücre farklılaşması üzerinde ilaçların etkisini araştırmak üzere de kullanılabilir. Başlangıçta Asselineau ve Prunieras tarafından geliştirilen <s6> yukarı ve Kopan ve ark. 7 tarafından değiştirilmiş, organotipik epitel sal kültürü sistemi üzerindeki kolajen hücrelerinin büyümesini içeren bir genel olarak, nispeten kolay kültürü modeli, haline geldi bir hava-sıvı arayüzü (Şekil 1A) muhafaza bağlanır. 10-14 gün boyunca, hücrelerin tabakalandırmak ve farklılığı, farklılaşma özgü Sitokeratin üreten bir tam kat epitel oluşturulması. Hasat sal yanı sıra standart moleküler ve biyokimyasal teknikler ile, histolojik olarak kontrol edilebilir. Bu yazıda, birincil insan keratinositlerinden sal kültürlerin üretimi için bir yöntem açıklanmaktadır. Aynı teknik kurulan epitel hücre çizgileri ile birlikte kullanılabilir, ve kolay bir şekilde, normal veya hastalıklı biyopsileri 8 den epiteliyal doku ile kullanım için uyarlanabilir. Birçok virüs hedef ya deri veya mukozal epitelin kendi replikatif yaşam döngüsünün bir parçası olarak. Son birkaç yılda, fizibilite organotipik sal kült kullanarakVirüs-konak hücre etkileşim okuyan bir yöntem olarak ures birkaç herpesvirüslerinin yanı sıra adenovirüsler, parvoviruses ve poxviruses 9 için gösterilmiştir. Organotipik sal kültürler böylece viral patogenez incelemek için uyarlanmış ve kalıcı hücre serilerinde tarıma olmayan bu virüs için antiviral ajanlarla test etmek için tek yöntem olabilir.
Protocol
Discussion
Burada genel olarak epitelyal farklılaşma incelemek için kullanılabilecek bir yöntem tarif eder, fakat, aynı zamanda kolaylıkla viral patogenezine gibi potansiyel terapötik etkinlik incelemek için adapte edilebilir. Birçok virüs herpesvirüslerinin ile olduğu gibi, HPV durumunda olduğu gibi, ya da virüs ömrü çevrimi içinde bir noktada, enfeksiyon primer olarak ya epitel hücreleri hedef. Konak hücre etkileşimleri: organotipik sal kültürler büyüyen zaman alıcı, virüsü incelemek için son derec…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Yazarlar E1E4 antikor tür hediye için Sally Roberts (University of Birmingham, Birmingham UK) teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma, Ulusal Kanser Enstitüsü (4R00CA137160-03) bir hibe ile desteklenmiştir.
Materials
| Name of Reagent | Company | Catalog number |
| Rat Tail Collagen type 1 (4-5mg/ml) | BD Biosciences | 354236 |
| DMEM without NaHC03 | Invitrogen | 12100-061 |
| NaHC03 | Sigma | S5761 |
| Hepes | Calbiochem | 391338 |
| Stainless Steel metal grids | Williams and Mettle Co. | CR-03063-040-100-S |
| E medium11 | ||
| Epidermal Growth Factor | BD Biosciences | 354010 |
References
- Andrei, G., Duraffour, S., VandenOord, J., Snoeck, R. Epithelial raft cultures for investigations of virus growth, pathogenesis and efficacy of antiviral agents. Antiviral Research. 85, 431-449 (2010).
- Asselineau, D., Prunieras, M. Reconstruction of ‘simplified’ skin: control of fabrication. The British Journal of Dermatology. 111, 219-222 (1984).
- Bodily, J., Alam, S., Chen, H., Meyers, C. . Organotypic epithelial raft cultures and the study of the natural history of human papillomavirus. , (2006).
- Cheng, S., Schmidt-Grimminger, D. C., Murant, T., Broker, T. R., Chow, L. T. Differentiation-dependent up-regulation of the human papillomavirus E7 gene reactivates cellular DNA replication in suprabasal differentiated keratinocytes. Genes & Development. 9, 2335-2349 (1995).
- Dollard, S. C., Wilson, J. L., Demeter, L. M., Bonnez, W. R., Reichman, C., Broker, T. R., Chow, L. T. Production of human papillomavirus and modulation of the infectious program in epithelial raft cultures. OFF. Genes & Development. 6, 1131-1142 (1992).
- Frattini, M. G., Lim, H. B., Laimins, L. A. In vitro synthesis of oncogenic human papillomaviruses requires episomal genomes for differentiation-dependent late expression. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93, 3062-3067 (1996).
- Kopan, R., Traska, G., Fuchs, E. Retinoids as important regulators of terminal differentiation: examining keratin expression in individual epidermal cells at various stages of keratinization. The Journal of Cell Biology. 105, 427-440 (1997).
- Longworth, M. S., Laimins, L. A. Pathogenesis of human papillomaviruses in differentiating epithelia. Microbiology and Molecular Biology Review. 68, 362-372 (2004).
- Meyers, C., Frattini, M. G., Hudson, J. B., Laimins, L. A. Biosynthesis of human papillomavirus from a continuous cell line upon epithelial differentiation. Science. 257, 971-973 (1992).
- Wilson, R., Laimins, L. A. . Differentiation of HPV-Containing Cells Using Organotypic Raft Culture or Methylcellulose. , 119-119 (2006).
- zur Hausen, H. Papillomavirus infections–a major cause of human cancers. Biochimica et Biophysica Acta. 1288, F55-F78 (1996).
