Un<em> In vitro</em> La méthode pour imiter<em> In vivo</em> Différenciation épithéliale est décrite. De nombreux virus cibler les cellules épithéliales dans le cadre de leur cycle de vie virale, et cette méthode fournit un moyen d'examiner le virus: les interactions hôte-qui ressemble plus à ce qui se produit<em> In vivo</em>. Cette technique peut être utilisée avec des kératinocytes primaires, des lignées cellulaires établies, ainsi que la normale ou pathologique des tissus de biopsie.
Le développement de cultures organotypiques radeau épithéliales a fourni aux chercheurs un système efficace dans le système in vitro qui reproduit fidèlement la différenciation épithéliale récapitule. Il ya beaucoup d'utilisations de ce système. Par exemple, la capacité de croître des cultures tridimensionnelles radeau organotypiques de kératinocytes a été un jalon important dans l'étude du virus du papillome humain (VPH) 1. Le cycle de vie du VPH est étroitement liée à la différenciation de l'épithélium pavimenteux 2. Organotypiques cultures radeau épithéliales comme démontré ici de reproduire le cycle de vie complet du virus du papillome, y compris la production de virus 3,4,5. En outre, ces cultures présentent des lésions dysplasiques radeau similaires à ceux observés lors de l'infection in vivo par le VPH. Par conséquent ce système peut également être utilisée pour étudier les cancers des cellules épithéliales, ainsi que l'effet des drogues sur la différenciation des cellules épithéliales en général. Initialement développé par Asselineau et Prunieras <sjusqu'à> 6 et modifié par Kopan et al. 7, le système épithélial organotypique culture radeau a mûri pour devenir un général, modèle de culture relativement facile, ce qui implique la croissance des cellules sur le collagène se branche maintenue à l'interface air-liquide (figure 1A). Au cours de 10-14 jours, les cellules de stratifier et de différencier, formant un épithélium sur toute son épaisseur qui produit la différenciation spécifiques cytokératines. Radeaux récoltées peuvent être examinés histologiquement, ainsi que par des techniques classiques moléculaires et biochimiques. Dans cet article, nous décrivons une méthode pour la génération des cultures primaires de radeau des kératinocytes humains. La même technique peut être utilisée avec des lignées de cellules épithéliales, et peut facilement être adapté pour une utilisation avec du tissu épithélial à partir de biopsies normales ou malades 8. De nombreux virus cibles soit l'épithélium cutané ou muqueux, dans le cadre de leur cycle de vie réplicative. Au cours des dernières années, la possibilité d'utiliser le culte radeau organotypiqueres comme une méthode d'étude des interactions virus-hôte cellulaire a été montré pour plusieurs virus de l'herpès, ainsi que les adénovirus, parvovirus, poxvirus et 9. Cultures organotypiques radeau peut donc être adaptée afin d'examiner la pathogenèse virale, et sont les seuls moyens pour tester de nouveaux agents antiviraux pour les virus qui ne sont pas cultivables dans des lignées cellulaires permanentes.
Nous décrivons ici une méthode qui peut être utilisé pour étudier la différenciation épithéliale en général, mais peut également être facilement adapté pour étudier la pathogenèse virale, ainsi que l'efficacité de traitements potentiels. De nombreux virus cibler les cellules épithéliales, soit que le site primaire de l'infection, comme dans le cas du VPH, ou à un certain moment dans le cycle de vie du virus, comme avec des herpèsvirus. Bien que de plus en plus les cultures organotypiques rade…
The authors have nothing to disclose.
Les auteurs tiennent à remercier Sally Roberts (Université de Birmingham, Birmingham au Royaume-Uni) pour le don sorte de l'anticorps E1E4. Ce travail a été soutenu par une subvention de l'Institut national du cancer (4R00CA137160-03).
Name of Reagent | Company | Catalog number |
Rat Tail Collagen type 1 (4-5mg/ml) | BD Biosciences | 354236 |
DMEM without NaHC03 | Invitrogen | 12100-061 |
NaHC03 | Sigma | S5761 |
Hepes | Calbiochem | 391338 |
Stainless Steel metal grids | Williams and Mettle Co. | CR-03063-040-100-S |
E medium11 | ||
Epidermal Growth Factor | BD Biosciences | 354010 |