기본 인적 Keratinocytes에서 Organotypic 뗏목 문화의 생성
Summary
<em> 체외에서</em모방하는> 방법<em> 생체내에서</em> 상피 분화가 설명되어 있습니다. 대부분의 바이러스는 바이러스 라이프 사이클의 일부로서 상피 세포를 타겟으로,이 방법은 바이러스를 검사하는 수단을 제공합니다 : 호스트 상호 작용을보다 밀접하게 발생하는 것이 비슷한 것을<em> 생체내에서</em>. 이 기술은 기본 keratinocytes 설립 세포 라인뿐만 아니라, 정상 또는 질병 생검 조직에서 사용할 수 있습니다.
Abstract
organotypic 상피 뗏목 문화의 발달은 체외 시스템을 충실히 recapitulates 상피 분화에 효율적으로 연구자를 제공합니다. 이 시스템에 대한 많은 용도가 있습니다. 예를 들어, keratinocytes의 입체 organotypic 뗏목 문화를 성장하는 능력은 인간 papillomavirus (HPV) 1의 연구에 중요한 이정표가되었습니다. HPV의 라이프 사이클은 긴밀하게 편평 상피 2의 분화에 링크되어 있습니다. 같은 Organotypic 상피 뗏목 문화가 여기에 바이러스 생산 3,4,5 포함한 전체 papillomavirus 수명주기를 재현 보여주었다. 또한, 이러한 뗏목 문화가 HPV와 생체내 감염에 따라 관찰 비슷한 dysplastic 병변을 나타냅니다. 따라서이 시스템은 또한 상피 세포 암뿐만 아니라, 일반적으로 상피 세포 분화에 대한 약물의 효과를 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 원래 Asselineau 및 Prunieras 개발한 <s6> 백업 및 Kopan 외 7.에 의해 수정, organotypic 상피 뗏목 문화 시스템이 콜라겐으로 세포의 성장과 관련된 일반적인, 비교적 쉬운 문화 모델로 성숙 공기 – 액체 인터페이스 (그림 1A)에서 관리하고 플러그. 10-14일의 과정 동안, 전지 계충화하다과 차별화, 차별화 특정 cytokeratins을 생산하고 전체 두께 상피 형성. 수확 보트는뿐만 아니라 표준 분자 및 생화 학적 기법으로, histologically 검사를 할 수 있습니다. 이 문서에서는 기본 인간 keratinocytes에서 뗏목 문화의 생성을위한 방법을 설명합니다. 동일한 기술은 설립 상피 세포 라인과 함께 사용할 수 있으며, 쉽게 정상 또는 질병 biopsies 8 시부터 상피 조직을 사용하기 위해 적용할 수 있습니다. 많은 바이러스가 대상 중 피부 또는 점막 상피 자신의 replicative 수명주기의 일부로. 지난 몇 년 동안의 가능성은 organotypic 뗏목 예찬에게 사용바이러스 숙주 세포 상호 작용을 연구하는 방법으로서 ures는 여러 herpesviruses뿐만 아니라 adenoviruses, parvoviruses 및 poxviruses 9 보여줘왔다. Organotypic 뗏목 문화는 따라서 바이러스 pathogenesis를 조사하기 위해 적응하고, 영구 세포 라인에 cultivable없는 이들 바이러스 소설 항바이러스 대리인을 테스트하는 유일한 수단입니다 수 있습니다.
Protocol
Discussion
여기서 일반적으로 상피 분화를 연구하는 데 사용할 수있는 방법을 설명하지만, 또한 쉽게 바이러스성 pathogenesis뿐만 아니라 잠재적인 치료제의 효능을 연구하기 위해 적용할 수 있습니다. 많은 바이러스 herpesviruses와 마찬가지로 HPV의 경우처럼, 또는 바이러스 생활주기의 어느 시점에서 감염의 주 사이트로서 중 상피 세포를 타겟팅합니다. 숙주 세포의 상호 작용 : organotypic 뗏목 문화를 성장하는…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자 E1E4 항체의 종류 선물 샐리 로버츠 (버밍엄 대학, 버밍햄 영국) 감사드립니다. 이 작품은 국립 암 연구소 (4R00CA137160-03)에서 교부금에 의해 지원되었다.
Materials
| Name of Reagent | Company | Catalog number |
| Rat Tail Collagen type 1 (4-5mg/ml) | BD Biosciences | 354236 |
| DMEM without NaHC03 | Invitrogen | 12100-061 |
| NaHC03 | Sigma | S5761 |
| Hepes | Calbiochem | 391338 |
| Stainless Steel metal grids | Williams and Mettle Co. | CR-03063-040-100-S |
| E medium11 | ||
| Epidermal Growth Factor | BD Biosciences | 354010 |
References
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