DNA損傷の存在下で不正確な複製は、すべての細胞型で観察し、広く直接ヒトの癌の開発に関連付けられていると信じられている細胞の再配列と特異的変異の大部分を担当しています。このような紫外線照射によって誘導されるようなDNA損傷は、著しく正確にゲノムテンプレートを複製する複製の能力を損なう。遺伝子産物の数は、複製が鋳型にDNA損傷を検出すると、必要とされるが確認されている。しかし、残りの課題は、これらのタンパク質は、複製中に病変の処理方法を決定することでした<em> in vivoで</em>。モデル系として大腸菌を用いて、我々は、2次元アガロースゲル分析がreplicatingプラスミドに生じた構造的な中間体を識別するために使用できる手順を説明します。<em> in vivoで</em>以下の紫外線誘発DNA損傷。この手順は、紫外線による損傷によってブロックされた複製フォークは、RecAタンパク質とRecFの経路に関連付けられているいくつかの遺伝子産物によって安定化される一時的な反転を受けることを示すために使用されています。技術は、これらの複製の中間体は、ヌクレオチド除去修復と複製が再開による病変の除去と相関する時間まで維持されていることを示している。
Jeiranian, H. A., Schalow, B. J., Courcelle, J. Visualization of UV-induced Replication Intermediates in E. coli using Two-dimensional Agarose-gel Analysis. J. Vis. Exp. (46), e2220, doi:10.3791/2220 (2010).