我们目前可以使用其中的一个两维的琼脂糖凝胶电泳分析,以确定紫外线照射后发生的复制中间体的结构的过程。
在DNA损伤的存在不准确的复制是负责大部分的细胞重排,并观察在所有类型的细胞,是人们普遍认为,直接与人类的癌症发展相关的突变。如紫外线照射引起的的DNA损伤,严重损害了精确重复的基因组模板的复制能力。已经确定的基因产物,需要复制时,在模板中遇到的DNA损伤。然而,剩下的挑战已确定在复制过程中如何将这些蛋白质的过程中病变<em>在体内</em>。利用大肠杆菌作为模型系统,我们描述了二维琼脂糖凝胶电泳分析程序,可以用来识别复制的质粒上出现的结构性中间体<em>在体内</em>下面的紫外线引起的DNA损伤。使用这个程序已经证明,阻止紫外线损伤的复制叉经过一个短暂的逆转,是由RecA和几个基因相关产品与RecF通路稳定。这些复制中间体保持,直到时间的病灶切除核苷酸切除修复和复制恢复相关的技术演示。
图1显示了典型的从野生型细胞的存在和紫外线损伤的情况下取得的结果。 〜1%的总质粒DNA损害的情况下,可以发现,在Y弧,当细胞迅速增长指数相。照射后,在Y形分子的瞬时增加观察堵塞的复制叉积累损坏的网站。 X形复制的中间体,也瞬时积累和坚持,直到一段时间,当病变修复相关。
南分析,可以砸出复制中间体的凝胶,用塑料吸管,纯化,并直接通过电子显微?…
The authors have nothing to disclose.
在我们的实验室的工作是事业奖由美国国家科学基金会和NIGMS,美国国立卫生研究院授予R15GM86839区MCB0551798支持。