Göz hayali Disk Görselleştirme Yardım Roman RFP Reporter Drosophila</em

Summary

Biz özellikle ifade edilir bir roman kırmızı floresan proteini (RFP) muhabiri tarif<em> Drosophila</em> Göz. Biz, ayrıntılı göz hayali disk diseksiyon için bir metodoloji ve nasıl bu muhabir diseksiyon ve gelişmekte olan göz özel hücre tiplerinin belirlenmesi yardım için kullanılabilir.

Abstract

<em> Drosophila</em> Göz nöron, sinyal iletimi ve nörodejenerasyon gibi alanlarda çalışmak için güçlü bir model sistem. Keşiflerin çoğu bu sistemi kullanarak, gelişmekte olan göz hayali disk fotoreseptör farklılaşma Spatiotemporal doğa yararlandılar. Ilk araştırmacı tanımlamak için göz disk öğrenmek ve incelemek için gerekli olan bu sistemi kullanmak için. Biz göz disk ve gelişmekte olan göz belirli hücre tiplerinin görselleştirme belirlenmesinde yardımcı olmak için yeni bir RFP muhabiri açıklar. Biz, ayrıntılı üçüncü instar larvaları göz hayali disk diseksiyon için bir metodoloji ve göz RFP muhabiri bu diseksiyon yardım anlatacağız. Bu göz RFP muhabiri sadece göz olarak ifade edilir ve sinyal amplifikasyonu için gerek kalmadan canlı doku veya fiksasyon sonra floresan mikroskopi kullanılarak görüntülenmiştir olabilir. Biz de bu muhabir göz disk içinde belirli hücreler türlerini tanımlamak için nasıl kullanılabileceğini göstermektedir. Bu protokol ve göz RFP muhabiri araştırmacı yardımcı olacak<em> Drosophila</em>, Temelde önemli biyolojik soruları yanıtlamak için göz.

Protocol

<ol><liDiseksiyon mikroskobu altında bir Sylgard tabağa PBS> İlk bir damla.</li><li> Sonraki spatula kullanarak bir şişe veya şişe birkaç dolaşıp üçüncü instar larvaları kaldırmak ve PBS koyun.</li><li> Diseksiyonu larva arka yolunda üçte ikisi kavramak ve daha sonra diğer çifti kullanmak için ön sonunda koyu renkli ağız kanca tutmak için (sağ elle) sol elinizle cımbız kullanın başlamak için.</li><li> Şimdi, yavaşça cımbız hem çiftleri birbirinden uzakta hareket ettirerek larva hariç…

Discussion

Drosophila göz hayali disk Diseksiyon basittir, ama ustalaşmak zaman alabilir. Kritik adımlar göz disk ve larva beyin uzak, diseksiyon belirlenmesi. Burada anlatılan göz RFP hattı kullanarak göz disk tanımlanması daha kolay yapılır. Olası değişiklikler antennal disk veya peripodial membran kaldırmak, ya da beyin giren PR aksonlar görselleştirmek bağlı optik lob bırakmak.

Göz RFP hattı klonlama Pred H-Stinger arttırıcı-muhabiri vektör ³ içine bi…