A Novel RFP Reporter in der Visualisierung des Eye Imaginalscheibe in Aid Drosophila</em

Summary

Wir beschreiben ein neuartiges rot fluoreszierendes Protein (RFP) Reporter, der speziell in den Ausdruck<em> Drosophila</em> Auge. Wir Detail eine Methodik für die Präparation des Auges Imaginalscheibe und wie diese Reporter lässt sich in der Präparation und Identifizierung von spezifischen Zelltypen in den Entwicklungsländern Auge zu unterstützen.

Abstract

Die<em> Drosophila</em> Auge ist ein leistungsfähiges Modell für die Erforschung von Bereichen wie Neurogenese, Signaltransduktion und Neurodegeneration. Viele der Entdeckungen gemacht mit diesem System haben den Vorteil der räumlich-zeitlichen Natur der Photorezeptor Differenzierung in den Entwicklungsländern Auge Imaginalscheibe genommen. Zur Nutzung dieses Systems ist es zunächst notwendig, den Forscher zu lernen, zu identifizieren und zerlegen das Auge Scheibe. Wir beschreiben ein neuartiges RFP-Reporter bei der Identifizierung des Auges Scheibe und die Visualisierung von spezifischen Zelltypen in den Entwicklungsländern Auge zu unterstützen. Wir Detail eine Methodik für die Präparation des Auges Imaginalscheibe vom dritten Larvenstadium und beschreiben, wie das Auge-RFP-Reporter kann in dieser Sektion zu unterstützen. Dieses Auge-RFP-Reporter ist nur in den Augen zum Ausdruck gebracht und visualisiert werden können mit Hilfe der Fluoreszenzmikroskopie entweder in lebendem Gewebe oder nach der Fixierung ohne die Notwendigkeit zur Signalverstärkung. Wir zeigen auch, wie dieser Reporter verwendet werden, um spezifische Zelltypen im Auge CD zu identifizieren. Dieses Protokoll und die Verwendung des Auges-RFP Reporter Hilfe Forscher mit dem<em> Drosophila</em> Auge um grundlegend wichtige biologische Fragen zu beantworten.

Protocol

<ol><li> Erster Platz ein Tropfen PBS auf eine Sylgard Teller unter einem Binokular.</li><li> Weiter zu entfernen mehreren wandernden dritten Larvenstadium aus einem Fläschchen oder eine Flasche mit einem Spatel und legen Sie sie in der PBS.</li><li> Zu Beginn der Präparation mit der linken Hand Pinzette (wenn Sie Rechtshänder sind) zu begreifen, eine Larve zwei Drittel des Weges in Richtung der hinteren und dann das andere Paar auf die dunkle Mundhaken am vorderen Ende zu halten.</li><li> Jetzt ziehen Sie vorsichtig …

Discussion

Dissektion der Drosophila Auge Imaginalscheibe ist einfach, aber kann die Zeit zu meistern. Die entscheidenden Schritte sind die Identifikation des Auges Disc und ihre dissection vom larvalen Gehirn. Bezeichnung des Auges Disc wird dadurch erleichtert, mit dem Eye-RFP line hier beschrieben. Mögliche Änderungen werden dem Fühlerglied Disc oder der peripodial Membran zu entfernen, oder zur optischen Lappen an der PR Axone in das Gehirn zu visualisieren lassen.

Das Auge-RFP Linie wu…