A Novel Reporter RFP para ajudar na visualização do Disco Imaginal Eye em Drosophila</em

Summary

Nós descrevemos um romance vermelho proteína fluorescente repórter (RFP) que se expressa especificamente na<em> Drosophila</emOlho>. Detalhamos uma metodologia para a dissecção do disco imaginal olho e como este repórter pode ser utilizada para auxiliar na dissecção e identificação de tipos específicos de células no olho desenvolvimento.

Abstract

O<em> Drosophila</emOlho> é um sistema poderoso modelo para o estudo de áreas como a neurogênese transdução de sinal, e neurodegeneração. Muitas das descobertas feitas com esse sistema têm aproveitado a natureza espaço-temporal de diferenciação fotorreceptoras no disco olho desenvolvimento imaginal. Para utilizar este sistema é necessário primeiro para o pesquisador que aprender a identificar e dissecar o disco olho. Nós descrevemos um romance repórter RFP para ajudar na identificação do disco olho ea visualização de tipos específicos de células no olho desenvolvimento. Detalhamos uma metodologia para a dissecção do disco imaginal olho de larvas de terceiro instar e descrever como o repórter-olho RFP pode ajudar neste dissecção. Este repórter-olho RFP é expresso apenas no olho e pode ser visualizado através de microscopia de fluorescência tanto no tecido vivo ou após a fixação sem a necessidade de amplificação de sinal. Nós também mostrar como este repórter pode ser usado para identificar tipos específicos de células dentro do disco olho. Este protocolo eo uso do repórter-olho RFP vai ajudar os pesquisadores usando o<em> Drosophila</em> Olho para tratar fundamentalmente importantes questões biológicas.

Protocol

<ol><li> O primeiro lugar uma gota de PBS em um prato Sylgard sob um microscópio de dissecação.</li><li> Em seguida remover larvas várias vagando terceiro de um frasco ou garrafa com uma espátula e colocá-los na PBS.</li><li> Para começar a dissecção usar suas pinças mão esquerda (se você for destro) para agarrar uma larva de dois terços do caminho para a posterior e depois usar o outro par para manter a boca escura ganchos coloridos no final da anterior.</li><li> Agora puxe a larva movendo para além dos do…

Discussion

Dissecção do disco imaginal Drosophila olho é simples, mas pode levar algum tempo para dominar. Os passos críticos são a identificação do disco olho e sua dissecção longe do cérebro larval. Identificação do disco olho é mais fácil usar a linha dos olhos-RFP descrito aqui. Modificações possíveis são para remover o disco antenais ou a membrana peripodial, ou deixar o lobo óptico ligado a visualizar os axônios PR entrar no cérebro.

A linha dos olhos-RFP foi gerada …