본 논문에서 우리는 성인 쥐 심장 myocytes를 분리하고 문화에 전형 방법을 설명했다. Collagenase와 단백 분해 효소는 단일 myocytes을 소화하고 격리하는 데 사용됩니다. Myocytes는 대부분의 실험 요구 사항을 충족이 프로토콜을 따라 교양.
Abstract
교양 차 성인 쥐 심장 세포는 심장 혈관 연구에 중요한 모델 시스템입니다. 그럼에도 불구하고, 강력하고 실용적 교양 성인 myocytes의 설립은 많은 연구자에 대한 기술적 도전, 속도 – 제한 단계하실 수 있습니다. 여기 며칠 동안 문화에 가능한 남아 성인 쥐 심장 myocytes 높은 수율을 얻을 수있는 프로토콜을 설명했다. 마음은 낮은 칼슘 아래의 고립과 collagenase와 프로 테아제와 perfused입니다<sup> 2 +</sup> 조건은 단일 myocytes를 복구할 수 있습니다. CA<sup> 2 +</sup> – 관용 세포는 세포외 칼슘의 stepwise 증가를 얻을 수있다<sup> 2 +</sup세 이후 세척 단계에> 집중. 세포는 필터링된 문화 매체 resuspended 및 laminin 코팅 전표에 도금입니다. 이 프로토콜을 사용하여 얻은 교양 myocytes은 최대 4 일 동안 실용적이며, 전기 생리학, 생화학, 이미징 및 분자 생물학을 포함하여 대부분의 실험에 적합합니다.
Protocol
수술 부 I. 준비 쥐의 수술 전날, 모든 솔루션 만들어진 특정하게하지만, 아직 효소를 추가하지 마십시오. 버퍼 A, B 및 세척 버퍼는 모든 저장하기 전에 불임에 대한 필터링해야합니다. 버퍼는 모든 4 ° C.에 보관해야 6 – 잘 조직 문화 플레이트는 10-20 μg / 2 ML ML 1XSFM에서 laminin뿐만 아니라 전날과 도금해야합니다, 37 CO 2 배양기에서 ° C에서 저장해야합니다. 수술 당일,…
Discussion
중요한 단계는 고립된 마음이 재관류 시스템에 걸려있는 속도입니다. 효소 소화 기간의 길이는 각 쥐에 대해 약간 다를 수 있습니다. 조정은 마음이 소화의 일반 기간이 지난 후된다 얼마나 부드러 운지에 따라 달라집니다. 천천히 소화 효소가 + – 관용 건강한 세포 칼슘이를위한 필수 + 후 칼슘 2 복구.