במאמר זה תיארנו את הדרך טיפוסי לבודד תרבות עכברוש מבוגר myocytes לב. Collagenase ו פרוטאז משמשים לעכל לבודד myocytes יחיד. Myocytes תרבותי לעקוב בפרוטוקול זה לעמוד בדרישות הניסוי ביותר.
Abstract
Cultured העיקרי מכרסמים מבוגרים לתאי לב הם מערכת מודל חשוב למחקר קרדיווסקולרי. עם זאת, הקמתה של החזקה, myocytes קיימא מבוגר תרבותי יכול להיות מאתגר מבחינה טכנית, שער הגבלת צעד עבור חוקרים רבים. כאן אנו תיאר פרוטוקול להשיג תשואה גבוהה של מבוגר לב myocytes עכברוש שנותרו קיימא בתרבות במשך כמה ימים. הלב הוא מבודד perfused עם collagenase ו פרוטאז תחת Ca נמוך<sup> 2 +</sup> התנאים להתאושש myocytes יחיד. Ca<sup> 2 +</sup> עמיד תאים מתקבלים על ידי עליות בשלבים ב Ca תאיים<sup> 2 +</sup> ריכוז בשלושה שלבים לשטוף הבאים. תאים מסוננים, resuspended במדיום תרבות, מצופה על תלושי laminin מצופה. Myocytes Cultured שהושגו באמצעות פרוטוקול זה הם קיימא עבור עד ארבעה ימים ומתאימים רוב הניסויים כולל electrophysiology, ביוכימיה, ביולוגיה מולקולרית הדמיה.
Protocol
חלק א הכנה לניתוח יום לפני הניתוח חולדה, לוודא את כל פתרונות מורכבים, אבל לא להוסיף כל האנזימים עדיין. Buffers, B ו החיץ לשטוף צריכים להיות מסוננים על סטריליות לפני האחסון. מאגרים צריכים להיות מאוחסנים 4 ° C. <li style=";text-align:ri…
Discussion
הצעד הקריטי הוא המהירות שבה את הלב מבודד הוא תלה על מערכת זלוף. אורך תקופת עיכול אנזימטי עשוי להיות קצת שונה עבור כל חולדה. ההתאמה תלוי כמה רך הלב הופך לאחר תקופת סדירה של מערכת העיכול. ההתאוששות באיטיות של Ca 2 + לאחר עיכול אנזים חיוני להשגת Ca 2 +-סובלנית תאים …