Это сделано для того, как введение в патч зажим записи с Xenopus laevis ооциты. Она охватывает желточной мембраны удаление, формирование gigaohm уплотнение (gigaseal), и дополнительные преобразования патч для вне-из топологии.
Abstract
С момента разработки Sakmann и 1 Неер, 2, патч зажим было определено в качестве чрезвычайно полезный метод для электрофизиологических измерений одного или нескольких ионных каналов в клетках. Эта техника может быть применена к ионные каналы как в их родной среде и выражается в гетерологичных клетках, таких как ооциты собран из африканских когтистых лягушка, Xenopus laevis. Здесь мы описываем устоявшихся техника патч зажим записи из ооцитов Xenopus. Этот метод используется для измерения свойств выразили ионные каналы либо в популяциях (macropatch) или индивидуально (одноканальный записи). Мы делаем ставку на методы максимального качества подготовки яйцеклетки и печатью поколения. Со всеми факторами оптимизированы, эта техника дает вероятность успешного поколения печать более чем на 90 процентов. Процесс может быть оптимизирован по-разному каждым исследователем на основе факторов, которые он или она считает наиболее важными, и мы представляем подход, которые приводят к наибольшим успехом в наших руках.
Protocol
Часть 1: Удаление желточной оболочки Приготовьте два набора щипцов. Мы предпочитаем № 5 щипцы, где один набор был слегка заостренными с файлом. Также приготовьте пипетки стеклянные передачи путем обрезки и противопожарной полировка 7 "пипетки Пастера. Рекомендуется: Д…
Discussion
Есть много параметров электрофизиологических записи не обсуждаются. Буровая установка, система управления шумом, канал выражения, а также записи протоколов все же решающее значение для хороших результатов эксперимента.
По нашему опыту, это наиболее важные параметры для формирования надежн?…
Acknowledgements
Сокращение решение рецепт от лаборатории РАО Aldrich. Мы благодарим следующие финансовые учреждения и фонды поддержки: Национальный институт здоровья, Национальный научный фонд, Американской кардиологической ассоциации, Ассоциации мышечной дистрофии, Дональд Б. и Делия Э. Бакстер Фонда Klingenstein фонд и фонд поддержки McKnight Neuroscience.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Patch Clamp Amplifier & Software
Instrument
HEKA or Axon
EPC-10
Or other similar device (e.g. HEKA EPC-9 or Axopatch 200B)
No. 5 forceps (two pairs)
Tool
Fine Science Tools
Oocyte shrinking solution
Reagent
Ingredient In mM
N-methyl-D-glucamine 220
HEPES 10
MgCl2 1
EGTA 10
Aspartic Acid 220
KCl 2
pH to 7.4 w/ N-methyl-D-glucamine
L Brown, A., E. Johnson, B., B. Goodman, M. Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in Xenopus Oocytes. J. Vis. Exp. (20), e936, doi:10.3791/936 (2008).