这是为了介绍,从非洲爪蟾卵母细胞来修补钳记录。它涵盖了卵黄膜去除,形成一个gigaohm密封(gigaseal),和可选的补丁外拓扑的转换。
由于其发展索克曼和内尔1,2,膜片钳已成为一个极为有用的方法,为单个或多个细胞离子通道的电生理测量。这种技术可以应用到离子通道,在其原生环境,并在异源细胞,如从非洲爪蛙,非洲爪蟾收获的卵母细胞,表达的。在这里,我们描述了补丁钳爪蟾卵母细胞的行之有效的技术。这项技术是用来衡量人口(macropatch)或单独(单声道录音)的表达离子通道的特性。我们专注于技术,以最大限度地提高卵母细胞的制备和密封代质量。随着各方面的因素进行了优化,这种技术提供了一个成功的印章代概率在90%以上。基于他或她认为最重要的因素的每一个研究员,这个过程可能是不同的优化,我们目前的方法,导致在我们手中最大的成功。
有许多的电生理记录参数,这里不讨论。钻机安装,系统噪声管理,渠道表达,和记录协议都良好的实验结果也很关键。
根据我们的经验,这些都是形成密封可靠,最关键的参数:高品质的卵母细胞,迅速取出卵黄膜(又名“剥皮”),使用新拉的移液器防尘,流畅的移液器,积极施加压力,在入浴时解决方案,在洗澡的简短的时间之前密封。话虽如此,经验差别很大,别人有自己的一组最重要的因素。
从RW Aldrich公司的实验室解决方案处方萎缩。我们感谢以下资助机构的支持和基础:美国国立卫生研究院,唐纳德B.肌肉萎缩症协会,美国国家科学基金会,美国心脏协会,和迪莉娅E.巴克斯特基金会,Klingenstein基金和神经科学的麦克奈特基金会。