Avec 22 3 anticorps Anti-PD-L1 se concentrent sur la biopsie et cytologie échantillons provenant de patients atteints de Cancer de poumon Non à petites cellules
Summary
Pour développer la capacité des laboratoires dans le monde entier pour évaluer l’admissibilité des patients atteints de cancer du poumon pour un traitement par pembrolizumab, d’une manière fiable et reproductible, nous avons développé un test qui utilise le concentré 22 3 anticorps sur un largement disponible autostainer immunohistochimique, pour les spécimens de biopsie et la cytologie.
Abstract
Pembrolizumab en monothérapie a été approuvé pour le traitement de première et deuxième ligne des patients atteints de cancer PD-L1-exprimant avancé de poumon de non à petites cellules (CPNPC). Essais pour PD-L1 expression avec le PD-L1 immunohistochimie (IHC) 22 3 test diagnostique compagnon, qui donne une proportion de tumeur marquer (TPS), a été validé sur un tissu tumoral. Nous avons développé un optimisé test laboratoire avancés (LDT) qui utilise le concentré 22 3 anticorps (AC) sur un appareil IHC largement disponible pour les spécimens de biopsie et cytologie. Le TPS de PD-L1 a été évalué avec 120 sections appariées ensemble-tumeur tissulaire et des échantillons de biopsie et avec 70 appariés échantillons de biopsie et cytologie (lavages bronchiques, n = 40 ; des épanchements pleuraux, n = 30). Les 22 3 que LDT axée sur le concentré a montré un taux élevé de concordance entre la biopsie (~ 100 %) et de la cytologie des spécimens (~ 95 %) en comparaison avec PD-L1 IHC expression déterminée à l’aide du test de 22 3 compagnon PD-L1 IHC à deux TPS Découpez points (≥ 1 % et ≥ 50 %). La LDT optimisée présentée ici, à l’aide du concentré de Ab 22 3 déterminer l’expression de PD-L1 dans les deux tissus tumoraux et dans les échantillons de cytologie, augmentera la capacité des laboratoires dans le monde entier pour évaluer l’admissibilité des patients atteints de CBNPC pour un traitement par pembrolizumab en monothérapie d’une manière fiable et reproductible.
Introduction
Des essais cliniques récents ont démontré l’efficacité de pembrolizumab, un anticorps monoclonal IgG4 kappa isotype anticorps humanisé qui bloque l’interaction entre la mort cellulaire programmée 1 (PD-1) et ses ligands, PD-L1 et L2-PD, dans le traitement des patients atteints de Advanced NSCLC1,2,3,4.
Actuellement, pembrolizumab est approuvé pour le traitement de NSCLC PD-L1-exprimant chez les deux patients naïfs de tout traitement avec une expression de PD-L1 TPS de ≥50 % et aucun récepteur de facteur de croissance épidermique (EGFR) ou les aberrations de génomique tumorale anaplastic lymphoma kinase (ALK)3 et pour précédemment traités avec un TPS de PD-L1 de ≥ 1 %1.
PD-L1 expression de la protéine détectée par IHC a été largement utilisée comme un dosage de biomarqueurs prédictifs des thérapies anti-PD-1/PD-L1. Dans les essais cliniques pembrolizumab, le TPS de PD-L1 obtenue avec fixés au formol des échantillons de tissus (FFIP) paraffine a déterminé en utilisant le PD-L1 IHC 22 3 compagnon essai5. Cet essai a été approuvé par la Food and Drug Administration (FDA) et a été marqué en Europe pour la détermination de la tumeur PD-L1 TPS5.
Les options globales supplémentaires dans des institutions pour des évaluations fiables et de qualité de la TPS de PD-L1 avec tdl qui utilisent le concentré d’anticorps 22 3 sont essentielles pour appuyer les décisions cliniques concernant le patient d’admissibilité pour pembrolizumab traitement. Un grand nombre de laboratoires de pathologie n’ont pas accès à l’analyse de l’IHC PD-L1 22 3 diagnostic compagnon. Par conséquent, le développement des TDL fiable et cohérent compatible avec les plateformes d’autostainer IHC supplémentaires, largement disponibles est essentiel.
Par ailleurs, il y a une nécessité d’établir des TDL en utilisant des échantillons de cytologie qui sont le seul spécimen type fréquemment disponible de patients atteints de CBNPC. L’essai de compagnon de PD-L1 IHC 22 3 est validé pour les résections, biopsies à l’aiguille centrale et bronchoscopies seulement si la bronchoscopie donne 100 cellules tumorales. Bien que les types d’échantillon ci-dessus sont souvent obtenus, échantillons cytologiques sont plus facilement perçus et sont le type d’échantillon plus couramment disponible dans certains établissements6,7. Cependant, il n’y a actuellement aucun test diagnostique validé disponibles pour l’évaluation de l’expression de PD-L1 dans des échantillons de cytologie ; TDL fiable compatible avec les échantillons de cytologie faciliterait davantage qualité PD-L1 test.
En outre, lors de l’établissement la validation clinique d’une LDT, l’IHC doit être effectuée de façon similaire au test commercial cliniquement validé correspondant8. Par exemple, plusieurs étapes critiques doivent être vérifiées pour obtenir le même signal dans des coupes sériées comme un titrage d’anticorps, retards de prétraitement, temps d’incubation et amplification systèmes9.
Nous avons récemment développé une LDT optimisée qui utilise le concentré 22 3 anticorps pour évaluer l’expression de PD-L1 sur les biopsies de tumeurs et cytologie échantillons10,11. Nous avons constaté une forte concordance avec la LDT contre le « gold standard » PD-L1 IHC 3 22 dosage10,11. Ce protocole cliniquement validé soutiendra PD-L1 fiables et de haute qualité, stable dans toutes les régions dans le monde.
Protocol
Representative Results
Discussion
Nous avons validé une LDT optimisée à l’aide du concentré d’anticorps 22 3 PD-L1, en le comparant avec les correspondants des essais commerciaux validés cliniquement10,11. Les 3 22 concentrés LDT à base d’anticorps ont montré un taux élevé de concordance entre la biopsie (~ 100 %) et les échantillons de cytologie (~ 95 %) par rapport à l’expression de PD-L1 IHC déterminée en utilisant le test IHC PD-L1 22 3 ≥ 1 % TPS tant la ≥50 % TPS po…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Cette étude a été commanditée par Merck & Co., Inc., Kenilworth, NJ, USA. Les bailleurs de fonds ont joué aucun rôle dans la conception de l’étude, la collecte de données et analyse, décision de publier ou préparation du manuscrit.
Materials
| NovaPrep HQ1 | Novacyt | NA | Preservative solution for cytology specimens |
| Novaprep® HQ+ B | Novacyt | NA | Mucolytic solution |
| Tissue-Tek VIP 6 | Sakura | 6042 VIP 6 | |
| Tissue-Tek TEC 5 Tissue Embedding Console System | Sakura | 5229 TEC 5 | |
| microscope glass slide SuperFrost Plus | Thermo Fisher Scientific | 4951PLUS4 | |
| DL-Dithiothreitol powder | Sigma-Aldrich | D3801 | |
| Heidolph Multi Reax Vortex Shaker | Thermo Fisher Scientific | 13-889-410 | |
| Shandon Cytoblock | Thermo Fisher Scientific | 7401150 | |
| 22C3 anti-PD-L1 concentrate antibody | Agilent Dako | #M365329 | |
| PD-L1 IHC 22C3 pharmDx | Agilent Dako | SK006 | |
| Autostainer Link 48 | Agilent Dako | AS480 | |
| BenchMark ULTRA autostainer | Ventana | #750-600 | |
| OptiView HQ Universal Linker | Ventana | #760-700 | |
| OptiView HRP Multimer | Ventana | #760-700 | |
| OptiView Amplification H2O2 | Ventana | #760-099 | |
| OptiView Amplifier | Ventana | #760-099 | |
| OptiView Amplification Multimer | Ventana | #760-100 | |
| OptiView DAB | Ventana | #760-700 | |
| OptiView Copper | Ventana | #760-700 | |
| Hematoxylin II | Ventana | #790-2208 | |
| Bluing Reagent | Ventana | #760-2037 | |
| Cell Conditioning 1 (CC1) | Ventana | #950-124 | |
| Tissue-Tek Film Coverslipper | Sakura | 4742 |
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