Met behulp van 22C 3 Anti-PD-L1 antilichaam concentreren op biopsie en cytologie monsters van niet-kleincellige longkanker kankerpatiënten
Summary
Uit te breiden het vermogen van laboratoria wereldwijd te beoordelen van de subsidiabiliteit van de patiënten met longkanker voor behandeling met pembrolizumab, op een betrouwbare en reproduceerbare wijze, ontwikkelden we een bepaling die gebruikmaakt van het 22C 3 antilichaam concentraat op een overal verkrijgbaar immunohistochemische autostainer, voor zowel biopsie en cytologie specimens.
Abstract
Pembrolizumab monotherapie heeft goedgekeurd voor de behandeling van de eerste – en tweedelijns van patiënten met PD-L1-uiting geven aan geavanceerde niet-kleincellige longkanker (NKCLK). Testen voor PD-L1 expressie met de PD-L1 immunohistochemistry (IHC) 22C 3 metgezel diagnostische test, waardoor een deel van de tumor score (TPS), heeft gevalideerd op tumor weefsel. We ontwikkelden een geoptimaliseerde laboratorium ontwikkelde test (LDT) die gebruikmaakt van het 22C 3 antilichaam (Ab) concentraat op een grote schaal beschikbaar IHC autostainer voor biopsie en cytologie specimens. De PD-L1-TPS werd beoordeeld met 120 gepaarde geheel-tumor weefselsecties en biopsie monsters en met 70 gepaarde biopsie en cytologie monsters (bronchiale wast, n = 40; pleurale effusie, n = 30). De 22C 3-Ab die concentraat gebaseerde LDT een hoge mate van overeenstemming tussen biopsie (~ 100%) en cytologie specimens (~ 95% toonde) in vergelijking met de PD-L1 IHC expressie bepaald met behulp van de PD-L1 IHC 22C 3 metgezel assay op beide TPS gesneden punten (≥1%, ≥50%). De geoptimaliseerde LDT gepresenteerd hier, met behulp van het 22C 3 Ab concentraat om de uitdrukking van de PD-L1 in beide tumor weefsel en in specimens van de cytologie, zal het uitbreiden van de mogelijkheid van laboratoria wereldwijd te beoordelen van de subsidiabiliteit van de patiënten met NKCLK voor behandeling met pembrolizumab monotherapie in een betrouwbare en reproduceerbare manier.
Introduction
Recente klinische proeven hebben aangetoond dat de doeltreffendheid van pembrolizumab, een Latijnse monoclonal IgG4 kappa isotype antilichaam die de interactie tussen geprogrammeerde celdood 1 (PD-1 blokkeert) en haar liganden, PD-L1 en PD-L2, bij de behandeling van patiënten met geavanceerde NKCLK1,2,3,4.
Op dit moment is pembrolizumab goedgekeurd voor de behandeling van PD-L1-uitdrukken in zowel behandeling-naïeve patiënten met een uitdrukking van de PD-L1 TPS ≥50% en geen epidermale groeifactor receptor (EGFR) of anaplastic lymfoom kinase (ALK) genomic tumor aberraties3 NKCLK en voor eerder behandelde patiënten met een PD-L1-TPS ≥1%1.
PD-L1 eiwituitdrukking gedetecteerd door IHC heeft wijd gebruikt als een voorspellende biomarker assay voor anti-PD-1/PD-L1 therapieën. In pembrolizumab klinische proeven, werd de PD-L1-TPS verkregen met formaline-vaste paraffine-ingebedde (FFPE) weefselsteekproeven bepaald met behulp van de PD-L1 IHC 22C 3 metgezel assay5. Deze bepaling is is goedgekeurd door de Amerikaanse Food and Drug Administration (FDA) en CE-markering in Europa voor de bepaling van de tumor PD-L1 TPS5.
Extra globale opties over instellingen voor betrouwbare en kwalitatief hoogstaande evaluaties van de PD-L1-TPS met LDTs die het 22C 3 antilichaam concentraat gebruiken zijn essentieel voor de ondersteuning van klinische beslissingen met betrekking tot de patiënt in aanmerking te komen voor pembrolizumab behandeling. Een groot aantal pathologie laboratoria hebben geen toegang tot de metgezel diagnostische PD-L1 IHC 22C 3 assay. De ontwikkeling van betrouwbare en consistente LDTs compatibel met extra, verkrijgbaar IHC autostainer platformen is daarom essentieel.
Bovendien is er behoefte aan vaststelling van de LDTs met behulp van de cytologie monsters die het enige exemplaar type vaak beschikbaar van NKCLK patiënten zijn. De PD-L1 IHC 22C 3 metgezel test is gevalideerd voor resections, core naald biopsieën en bronchoscopies alleen als de bronchoscopie 100 tumorcellen levert. Hoewel de bovenstaande steekproef typen vaak worden verkregen, cytologie monsters zijn gemakkelijker verzameld en de meest beschikbaar monster type in sommige instellingen6,7. Er is momenteel echter geen gevalideerde diagnostische test beschikbaar voor de evaluatie van de PD-L1-expressie in cytologie monsters; betrouwbare LDTs compatibel met cytologie monsters zou verder vergemakkelijken kwalitatief hoogwaardige PD-L1 testen.
Bovendien, bij de vaststelling van de klinische validatie van een LDT, de IHC moet worden uitgevoerd op een gelijkaardige manier aan de overeenkomstige klinisch gevalideerde commerciële test8. Bijvoorbeeld enkele kritische stappen gecontroleerd moeten worden of krijgen hetzelfde signaal in seriële secties zoals titratie van antilichamen, voorbehandeling vertragingen, incubatietijd en versterking systemen9.
We zijn onlangs ontwikkeld met een geoptimaliseerde LDT die gebruikmaakt van het 22C 3 antilichaam concentraat te evalueren van de expressie van de PD-L1 op tumor biopsieën en cytologie monsters10,11. We vonden een hoge concordantie met de LDT versus de “gouden standaard” PD-L1 IHC 22C 3 assay10,11. Dit klinisch gevalideerde protocol zal ondersteuning voor betrouwbare, kwalitatief hoogwaardige PD-L1 testen tussen de regio’s wereldwijd.
Protocol
Representative Results
Discussion
We hebben een geoptimaliseerde LDT met behulp van het 22C 3 PD-L1 antilichaam concentraat, door het te vergelijken met de overeenkomstige klinisch gevalideerde commerciële test10,11gevalideerd. De 22C 3 geconcentreerd antilichaam gebaseerde LDT toonde een hoog percentage van de concordantie tussen de biopsie (~ 100%) en exemplaren van de cytologie (~ 95%) in vergelijking met de PD-L1 IHC expressie bepaald met behulp van de PD-L1 IHC 22C 3-bepaling op zowel ≥1 …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Deze studie werd gesponsord door Merck & Co., Inc., Kenilworth, NJ, USA. De financiers speelde geen rol in de studie ontwerp, gegevensverzameling en analyse, besloten tot bekendmaking of voorbereiding van het manuscript.
Materials
| NovaPrep HQ1 | Novacyt | NA | Preservative solution for cytology specimens |
| Novaprep® HQ+ B | Novacyt | NA | Mucolytic solution |
| Tissue-Tek VIP 6 | Sakura | 6042 VIP 6 | |
| Tissue-Tek TEC 5 Tissue Embedding Console System | Sakura | 5229 TEC 5 | |
| microscope glass slide SuperFrost Plus | Thermo Fisher Scientific | 4951PLUS4 | |
| DL-Dithiothreitol powder | Sigma-Aldrich | D3801 | |
| Heidolph Multi Reax Vortex Shaker | Thermo Fisher Scientific | 13-889-410 | |
| Shandon Cytoblock | Thermo Fisher Scientific | 7401150 | |
| 22C3 anti-PD-L1 concentrate antibody | Agilent Dako | #M365329 | |
| PD-L1 IHC 22C3 pharmDx | Agilent Dako | SK006 | |
| Autostainer Link 48 | Agilent Dako | AS480 | |
| BenchMark ULTRA autostainer | Ventana | #750-600 | |
| OptiView HQ Universal Linker | Ventana | #760-700 | |
| OptiView HRP Multimer | Ventana | #760-700 | |
| OptiView Amplification H2O2 | Ventana | #760-099 | |
| OptiView Amplifier | Ventana | #760-099 | |
| OptiView Amplification Multimer | Ventana | #760-100 | |
| OptiView DAB | Ventana | #760-700 | |
| OptiView Copper | Ventana | #760-700 | |
| Hematoxylin II | Ventana | #790-2208 | |
| Bluing Reagent | Ventana | #760-2037 | |
| Cell Conditioning 1 (CC1) | Ventana | #950-124 | |
| Tissue-Tek Film Coverslipper | Sakura | 4742 |
References
- Garon, E. B., et al. Pembrolizumab for the treatment of non-small-cell lung cancer. The New England Journal of Medicine. 372 (21), 2018-2028 (2015).
- Herbst, R. S., et al. Pembrolizumab versus docetaxel for previously treated, PD-L1-positive, advanced non-small-cell lung cancer (KEYNOTE-010): a randomised controlled trial. The Lancet. 387 (10027), 1540-1550 (2016).
- Reck, M., et al. Pembrolizumab versus Chemotherapy for PD-L1-Positive Non-Small-Cell Lung Cancer. The New England Journal of Medicine. 375 (19), 1823-1833 (2016).
- Langer, C. J., et al. Carboplatin and pemetrexed with or without pembrolizumab for advanced, non-squamous non-small-cell lung cancer: a randomised, phase 2 cohort of the open-label KEYNOTE-021 study. The Lancet Oncology. 17 (11), 1497-1508 (2016).
- Buttner, R., et al. Programmed Death-Ligand 1 Immunohistochemistry Testing: A Review of Analytical Assays and Clinical Implementation in Non-Small-Cell Lung Cancer. Journal of Clinical Oncology. 35 (34), 3867-3876 (2017).
- Folch, E., Costa, D. B., Wright, J., VanderLaan, P. A. Lung cancer diagnosis and staging in the minimally invasive age with increasing demands for tissue analysis. Translational Lung Cancer Research. 4 (4), 392-403 (2015).
- Padmanabhan, V., et al. Improving Adequacy of Small Biopsy and Fine-Needle Aspiration Specimens for Molecular Testing by Next-Generation Sequencing in Patients With Lung Cancer: A Quality Improvement Study at Dartmouth-Hitchcock Medical Center. Archives of Pathology & Laboratory Medicine. 141 (3), 402-409 (2017).
- Tsao, M. S., et al. . IASLC ATLAS of PD-L1 Immunohistochemistry Testing in Lung Cancer. , (2017).
- Thunnissen, E., de Langen, A. J., Smit, E. F. PD-L1 IHC in NSCLC with a global and methodological perspective. Lung Cancer. , 102-105 (2017).
- Ilie, M., et al. Use of the 22C3 anti-PD-L1 antibody to determine PD-L1 expression in multiple automated immunohistochemistry platforms. PLoS One. 12 (8), e0183023 (2017).
- Ilie, M., et al. Use of the 22C3 anti-programmed death ligand 1 antibody to determine programmed death ligand 1 expression in cytology samples obtained from non-small cell lung cancer patients. Cancer Cytopathology. 126 (4), 264-274 (2018).
- Skov, B. G., Skov, T. Paired Comparison of PD-L1 Expression on Cytologic and Histologic Specimens From Malignancies in the Lung Assessed With PD-L1 IHC 28-8pharmDx and PD-L1 IHC 22C3pharmDx. Applied Immunohistochemistry & Molecular Morphology. 25 (7), 453-459 (2017).
- Russell-Goldman, E., Kravets, S., Dahlberg, S. E., Sholl, L. M., Vivero, M. Cytologic-histologic correlation of programmed death-ligand 1 immunohistochemistry in lung carcinomas. Cancer Cytopathology. 126 (4), 253-263 (2018).
- Heymann, J. J., et al. PD-L1 expression in non-small cell lung carcinoma: Comparison among cytology, small biopsy, and surgical resection specimens. Cancer Cytopathology. 125 (12), 896-907 (2017).
- Stoy, S. P., Rosen, L., Mueller, J., Murgu, S. Programmed death-ligand 1 testing of lung cancer cytology specimens obtained with bronchoscopy. Cancer Cytopathology. 126 (2), 122-128 (2018).
- Ilie, M., Hofman, P. Reproducibility of PD-L1 assessment in non-small cell lung cancer-know your limits but never stop trying to exceed them. Translational Lung Cancer Research. 6 (Suppl 1), S51-S54 (2017).
