同所性同種人間原発性脳腫瘍を運ぶ免疫不全マウスにおける準備と同種の人間のリンパ球の脳定位固定装置の管理のためのプロトコルを紹介します。本研究は、実現可能性と intrabrain 配信細胞免疫療法の抗腫瘍効果の概念実証を提供します。
膠 (GBM)、成人では、最も頻繁に、積極的な脳腫瘍の症例は、予後不良な一般的に関連付けられている、最後の 10 年間で不足している効率的な治療法が提案されています。新しい治療戦略を設計するための有望な候補者、間細胞免疫療法は高度侵襲を排除する対象となっているし、化学療法放射線腫瘍細胞、可能性がありますこの癌の迅速かつ致命的な再発に関与します。したがって、腫瘍近傍の人間の Vϒ9Vδ2 の T リンパ球など、同種の糸球体基底膜反応免疫細胞エフェクター administration(s) 効率を提供するユニークな機会を表しますが、非常に直接の治療薬に集中して、脳の悪性腫瘍のサイト。同所性同種人間原発性脳腫瘍を運ぶ免疫不全マウスにおける準備と同種の人間のリンパ球の脳定位固定装置の管理のためのプロトコルを紹介します。本研究は、可能性と intrabrain 腫瘍ベッド内で同種の人間のリンパ球の定位注射に依存するこれらの細胞免疫療法の抗腫瘍効果の前臨床証拠の概念を提供します。
糸球体基底膜 (WHO グレード IV 星状細胞腫) は、成人では最も頻繁に、積極的な脳腫瘍の症例です。積極的な治療法は手術とラジオ化学療法を組み合わせた、GBM 変わりません非常に予後不良 (14.6 カ月と 2 年死亡 > 73% の生存期間中央値)1に関連付けられています。これは、いくつかの効率的な治療の進歩が2の最後の 10 年を検証されている証拠します。効果的な治療戦略3,4、5のデザイン候補の中で免疫療法6現在検討するいると高度侵襲とラジオ/化学療法抵抗性の腫瘍を削除セルは、迅速かつ致命的な腫瘍再発7への重要な貢献の疑いがあります。様々 な潜在的な免疫学的ターゲットが識別されたとの提案された免疫療法や自然を含むまたは変更した αβ GBM の腫瘍抗原など応力誘起分子8,9、ϒδ T リンパ球 10。選択した糸球体基底膜反応免疫細胞エフェクターを管理する可能性は、残存腫瘍のサイトに直接エフェクター リンパ球の上昇量を提供するユニークな機会を表します。この戦略をサポートするため、我々 は最近脳腫瘍 GBM 患者9,11の開発を忠実に同所性同種ヒト糸球体基底膜移植を運ぶ免疫不全マウスに基づくモデルに要約を示しています。さらに、これらのモデルに対して転送された同種の人間 Vϒ9Vδ2T のリンパ球の強い抗腫瘍活性効率を示すため使用されました。
このプロトコルでは、糸球体基底膜、同種リンパ球の養子の転送に基づくなどの脳腫瘍の定位放射線免疫療法を達成するため重要な実験手順について説明します。記事ショー: (i) 治療同種免疫エフェクター T リンパ球, リンパ球 Vϒ9Vδ2T 人間; などの増幅(ii) これらのエフェクター T のリンパ球の注射用の準備(iii) 内腫瘍近傍の脳定位放射線管理のための手順。この記事は、定位注射後これらの細胞のエフェクターの行動に洞察力を提供します。
ここで紹介する治療法は、それぞれの脳腫瘍免疫不全マウスの線量あたり20 x 106エフェクター細胞の注入に基づいています。初期の in vitro拡張ステップは、免疫細胞の大量生産に必要です。したがって、非特異的細胞拡張フィトヘマグルチニン (PHA L) を使用して実行され、同種フィーダー細胞を照射: 健常者とエプスタイン バール ウイルス EBV 変換 B リンパ芽球細胞から末梢血単核球 (PBMCs)EBV を含む培養 1 μ G/ml シクロスポリン A の存在下で、マーモセット B95 8 細胞ラインから上清中の体外感染による PBMCs 由来株 (BLCLs)
抗糸球体基底膜の免疫細胞が比較され、生体外の試金9から選択。これらのエフェクター細胞がアクティブになります、標準プロトコルを使用して (例えば、人間 Vγ9Vδ2 T リンパ球9またはヒト抗ヘルペス ウイルス T リンパ球12) 性質に従って最低純度として日常的に、> 80% で増幅フローサイトメトリー解析をチェックします。下記のとおりセル拡張プロシージャは、様々 な人間のリンパ球のサブセットに適用されます。
養子伝選択ネイティブまたは設計された免疫エフェクター細胞腫瘍浸潤の脳腫瘍、非変形細胞15、に対して反応性を制限することの世話などを効率的に治療するために有望なアプローチを表す 16,17,18。ただし、脳を含む中枢神経系は、血液脳関門の存在と古典的なリンパ排液システム<sup class="xref"…
The authors have nothing to disclose.
著者は、ナントから大学病院動物施設 (UTE) ナントの畜産とケア、細胞と組織イメージング、イメージング ナント大学 (MicroPICell) の中核施設とフローサイトメトリー施設 (Cytocell) のスタッフに感謝します。彼らの専門家のテクニカル サポート。この仕事 INSERM、CNRS、ユニヴェルシテ ・ ド ・ ナント、Institut 国立デュがん (インカ #PLBio2014-155)、リーグのナシオナル contre le がん (AO 地域間 2017 年)、欧州コンソーシアム時代ネット Transcan2 によって資金が供給された (Immunoglio)。チームは財団注ぐラ凝った Medicale (DEQ20170839118) によって資金を供給します。LabEX 囲碁のコンテキストでこの作品を実現し、IHU セスタス プログラムでサポートされている、国家研究機関 Investissements d’Avenirを介してプログラム ANR-11-LABX-0016-01 と ANR-10-IBHU-005、それぞれ。IHU セスタス プロジェクトはナント メトロポールとペイ ・ ド ・ ラ ・ ロワール地域でもサポートされます。著者は、Chirine ラフィア ・が原稿を修正ヘルプを提供することをありがちましょう。
PBMCs | from 3 different healthy donors | ||
BLCLs | from 3 different donors | ||
Roswell Park Memorial Institute medium (RPMI) | Gibco | 31870-025 | |
FCS | Dutscher | S1810-500 | |
L-glutamine | Gibco | 25030-024 | |
penicillin/streptomycin | Gibco | 15140-122 | |
IL-2 | Novartis | proleukin | |
PHA-L | Sigma | L4144 | |
Stereotaxic frame | Stoelting Co. | 51600 | |
Mouse adaptator for stereotaxic frame | Stoelting Co. | 51624 | |
microsyringe pump injector | WPI | UMP3-4 | |
NanoFil Syringe | WPI | NF34BV-2 | |
NSG mice | Charles River | NSGSSFE07S | |
Ketamine | Merial | Imalgène 1000 | |
Xylazine | Bayer | Rompur 2% | |
Scissors | WPI | 201758 | |
Forceps | WPI | 501215 | |
OmniDrill 115/230V | WPI | 503598 | |
Vicryl 4-0 | Ethicon | VCP397H | |
Xylocaine | Astrazeneca | 3634461 |