Les tests comportements présenté ici vise à détecter les déficits fonctionnels chez les rats après traumatisme crânien. Quatre tests spécifiques sont présentés qui détectent des déficits dans les comportements afin de refléter les dommages aux zones spécifiques du cerveau, parfois jusqu’à un an après une blessure.
Avec l’incidence croissante du traumatisme crânien (TCC) dans les populations civiles et militaires, TBI est maintenant considérée comme une maladie chronique ; Cependant, peu d’études ont étudié les effets à long terme de dommage dans les modèles de rongeurs du TBI. Montré ici sont des mesures comportementales qui sont bien établies dans la recherche TBI pour fois tôt après une lésion, tels que deux semaines, jusqu’à deux mois. Certaines de ces méthodes ont déjà servis ULTERIEUREMENT après une blessure, jusqu’à un an, mais en très peu de laboratoires. Les méthodes ont démontré Voici une courte évaluation neurologique pour tester les réflexes, une Balance à plateau pour tester la balance, un faisceau de concordance pour tester l’équilibre et coordination motrice et une version de mémoire de travail du labyrinthe qui peut être sensible aux déficits en eau Morris mémoire de référence. Rats mâles ont été traités et préalablement formés pour neurologique, équilibre et coordination motrice teste avant de recevoir parasagittale fluid percussion blessures (FPI) ou blessure simulée. Des rats peuvent être testés sur l’évaluation neurologique courte (neuroscore), la balance à plateau, et la faisceau-marche plusieurs fois, tout en testant sur le labyrinthe de l’eau ne peut être faite une fois. Cette différence est parce que les rats peuvent se souvenir de la tâche, confondant ainsi les résultats si répété les tests est tentée chez le même animal. Lors de l’essai d’un à trois jours après la lésion, des différences significatives sont détectés dans trois tâches non cognitives. Cependant, des différences dans la tâche de faisceau-Walk n’étaient pas détectables à des points plus tard (après 3 mois). Les déficits ont été détectés à 3 mois dans la Balance à plateau et à 6 mois dans le neuroscore. Déficits de mémoire de travail ont été détectés à 12 mois après la blessure, et un déficit dans une mémoire de référence pour la première fois à 12 mois. Ainsi, des tests comportements standards peuvent être des mesures utiles des déficits comportements persistants après FPI.
Les méthodes présentées ici sont conçus pour détecter les déficits fonctionnels dans les zones spécifiques du cerveau provoquées par un modèle expérimental de TBI chez le rat. On décrira quatre tests de comportement différent. Tout d’abord, l’évaluation neurologique courte, dénommée le neuroscore, peut être effectuée sans nécessiter aucun équipement spécialisé mais nécessite pratique ; ce test détecte des déficits dans les réflexes. Deuxièmement, le test de Balance à plateau détecte des déficits dans la capacité d’équilibrer. Cette tâche nécessite le gestionnaire à marquer le rat basé sur une échelle ordinale et nécessite une formation du gestionnaire. Le test de Balance à plateau nécessite un faisceau étroit et est sensible aux déficits dans le système vestibulaire. Le troisième test évalue la coordination vestibulomotor. Ce test est connu comme la tâche de faisceau-à pied, et bien que certains pré-formation du rat est nécessaire, cette procédure est plus objective que les deux précédents comme la latence pour traverser le faisceau est une mesure objective ne dépend de la notation subjective. Cette différence est parce qu’on mesure le temps de traverser un faisceau étroit pour atteindre un coffre. Le test de faisceau-marche nécessite un faisceau plus long que la Balance à plateau-, mais aussi une boîte d’évasion. Ce test mesure les déficits de coordination motrice et l’équilibre et est donc sensible aux dommages au cervelet et certaines zones du cerveau moteur connexes. La version de mémoire de travail du labyrinthe eau Morris (MWM-WM) teste avant tout fonction de l’hippocampe et l’intégration avec le cortex préfrontal ou la fonction exécutive. La version du labyrinthe de l’eau de Morris montré peut également servir pour détecter les déficits en référence mémoire1.
Ces méthodes ont été choisies d’après leur expérience professionnelle bien établie dans la littérature. Chacun d’eux a été efficace dans beaucoup de mains de laboratoires différents avec plusieurs lignées de rats au cours de nombreuses années de recherche. Toutefois, dans le passé, après l’accident des mesures jusqu’à deux semaines après les blessures étaient considérés comme des points dans le temps « chronique ». Ainsi, pour établir des techniques comportementales pour l’étude des effets chroniques du TBI chez les rongeurs, ces méthodes bien connues devaient être évalués pour la sensibilité détecter les TBI induit déficits aux moments plus longtemps après une blessure. Bien qu’il existe maintenant plusieurs modèles de rongeurs du TBI, le modèle FPI est l’un des plus largement utilisé et est appliqué dans la présente étude. Ce modèle a été publié dans les années 19502, et depuis lors, plus de 1 000 documents ont employé des FPI en rat3. La neuropathologie de ce type de blessure a été bien décrite par nos4 et autres5,6,7. En bref, les lésions neuronales dans l’hippocampe s’est avérée être dose-dépendante à l’aide de Fluoro-Jade coloration en temps court après la blessure, c’est-à-dire, 24-48 h ; alors que l’atrophie brute et cavitation y compris amincissement de la capsule interne et le cortex a été signalé à un an après blessure6,7.
La représentation la plus significative du fonctionnement du cerveau est évaluée en utilisant des indicateurs comportementaux après un traumatisme crânien expérimental. Toutefois, la grande majorité des expériences FPI qui utilisent des résultats comportements rendre mesures relativement tôt, généralement de 1 à 14 jours après la lésion. En utilisant les méthodes démontré ici, que certains déficits comportementaux peuvent être détectés à 12 mois après la blessure,1. Fonction neurologique, la fonction de vestibulomotor brut et coordination motrice fine ont été évalués les jours après l’accident (PIDs) 1-3 et à 3, 6 et 12 mois après la chirurgie, à l’aide d’une courte évaluation neurologique (Neuroscore ; modification du Schallert8), le Balance à plateau tâche et le faisceau-Walk tâche9,10,11. Référence et la mémoire ont été évalués à l’aide d’une version de mémoire de travail de la Morris water maze1,12,13.
Lorsqu’il procède à n’importe quel type de tests comportementaux, il est essentiel d’être cohérente. Ce détail comprend de nombreuses considérations qui semblent insignifiants, mais ont un impact majeur sur la réponse de l’animal. Une étape importante qui ne peut être négligée est l’acclimatation des animaux à leur situation de logement-cage/maison avant toute expérience. Cette préparation permet de réduire les effets de la réaction au stress physiologique des animaux, qui peuvent altérer les résultats comportementaux18. De même, il est absolument essentiel que tout est fait pour traiter tous les animaux de la même manière. Cette cohérence comprend, comme mentionnée précédemment, acclimatation à un logement et également une acclimatation à la manutention et de transport entre les chambres avant la formation ou d’essai. Ce concept ne peut être surestimé. Gestion bâclée d’animaux est un désastre à n’importe quel test comportemental19. De même, chaque effort doit à apporter aux animaux de laboratoire à la fois de la journée, que ce soit lors de leur cycle de clair ou foncé. Pour les critères examinés ici, tests au cours de la phase claire ou foncée est acceptable, tant que les tests sont effectués régulièrement. Les essais effectués à des moments différents au cours du cycle circadien s’est avéré altérer les résultats comportementaux18,20. En outre, le gestionnaire ainsi que l’animal doit être dans un état de stress gratuit, calme afin de maximiser l’exactitude des résultats.
Particulièrement dans le cas de la Neuroscore, négatifs et des faux positifs sont fréquents. Faux positifs se produisent généralement quand un animal n’est pas entièrement habitué à la manutention et de tests. L’animal doit être complètement détendu, alors la réponse observée est réfléchie et non pas à cause des muscles serrant de réagir sur de stress ou de peur. Un gestionnaire tendu peut influencer les résultats en transmettant le stress à l’animal. Par conséquent, tenant le rat trop serré ou trop lâche peuvent tous deux être problématiques. En outre, si le gestionnaire est nerveux, cela peut entraîner la réaction des rats. Il y a aussi le risque qu’un observateur inexpérimenté va mal interpréter les réponse de rat. Bonne formation et beaucoup de pratique sont indispensables à la réussite et la cohérence de la Neuroscore.
En général, la principale préoccupation avec ces tests est l’absence d’une grande différence et parfois pas de différence entre les groupes de traitement. Étant donné que les animaux peut réagir différemment aux différents gestionnaires, les bruits, les moments de la journée et éventuellement, saisons21, tout doit être fait pour réduire tous les facteurs de confusion possibles.
Les résultats des tâches-Balance à plateau et faisceau-Walk montrés ici démontrent que ces tests sont utiles tôt après une lésion pour détecter les déficits en fonction de vestibulomotor. Ces déficits généralement résoudre au fil du temps1,14. Dans ce modèle, 6 mois après la blessure, les déficits induite sur les blessures ont résolus. Les résultats du point de temps 6 mois indiquent qu’il n’y a aucune différence entre NAIVE, SHAM ou des rats blessés ; Cependant, tous les rats ont été reposantes dans leur maison pendant 6 mois, le vieillissement et la prise de poids. Ainsi, au moment où qu’ils sont testés de nouveau à 6 mois après la chirurgie (ou l’équivalents dans le cas de naïf), ils deviennent essentiellement de vieux et gras, et c’est pourquoi tous les groupes n’effectuent pas aussi bien qu’ils ont par rapport à leur base jour 0 résultats.
Une autre considération importante est que le test de comportement utilisé est le bon critère. Par exemple, les tests utilisés ici sont censés représenter la fonction de zones spécifiques du cerveau. Un exemple est le système vestibulaire, ce qui est important pour l’équilibre. Régions du cerveau impliquées dans la fonction sensorimotrice, telles que le cortex, y compris le cortex sensorimoteur, le thalamus, les neurones corticospinaux, les noyaux gris centraux, striatum-nigro, pour n’en nommer que quelques-uns, sont tous impliquées dans la coordination de le vestibulomotor. Ainsi, les déficits de la Balance à plateau ou faisceau-promenade indiquent éventuels déficits dans ces domaines. En outre, l’hippocampe et le cortex préfrontal sont impliqués dans l’apprentissage et la mémoire des fonctions testées par le labyrinthe de l’eau de mémoire de travail. Même si le critère approprié est choisi, les limites des tests utilisés doivent garder à l’esprit. Par exemple, aucun des essais présentés ici sont sensibles aux déficits d’humeur, comme la dépression, l’anxiété ou des interactions sociales telles que l’impulsivité, prise de décision ou agression. Je le répète, il est impératif de choisir le critère applicable à la région de cerveau et comportement à évaluer.
Interprétation et analyse des données comportementales doivent être envisagées avec prudence. Il est fortement recommandé d’inclure des analyses de puissance de chaque type d’essai séparément, parce que, à l’aide d’un résultat comportemental en guise d’un déficit neuronal, est par sa nature, une mesure brute d’un effet subtil. En outre, différents tests nécessitent différents types d’analyses statistiques. Par exemple, les tests Neuroscore et Balance à plateau décrits dépendent de l’interprétation d’un observateur qualifié pour marquer le comportement à l’aide d’une échelle ordinale. Ces types de données ne sont pas continues et statistiques pas distribuées normalement, donc non paramétriques doivent être utilisées, telles que le test de Kruskal-Wallis, tel que démontré dans les articles 6.1 et 6.2. Sinon, la poutre-marche et tests de labyrinthe de travail mémoire eau produisent des données qui sont continues et distribuées normalement, donc paramétriques statistiques peuvent être utilisés, tels que l’ANOVA à ou mesures répétées ANOVA bidirectionnelle, tel que démontré dans les Sections 6.3 et 6.4.
Les tâches comportementales présentées ici ont résisté à l’épreuve du temps et donnent des résultats reproductibles, particulièrement lorsqu’il est associé avec le modèle FPI chez le rat, bien que beaucoup d’autres méthodes de tests comportementaux pour les lésions cérébrales existent. Le neuroscore est une courte évaluation effectuée avec un minimum d’équipement. Autres tests de réflexes et la force sont disponibles et pourraient être incorporées dans une évaluation neurologique, telles que la tâche de pulsion latéral, le test d’akinésie, essai sur plan incliné et la force de préhension (voir Fujimoto et al. 22 et or et al. 23). the-Balance à plateau et faisceau-marche des tâches décrites sont des mesures de déficits vestibulomotor après une blessure. Vestibulomotor coordination peut considérer comme une mesure du comportement locomoteur brut, tandis que les autres mesures de déficits locomoteurs bruts comprennent le Rotarod, le pôle de rotation et ouvrez l’activité expérimentale. La capacité à nager, mesurée comme la vitesse de nage pendant le labyrinthe de l’eau, est également une indication de la coordination motrice brute22,23. La tâche de labyrinthe de l’eau de mémoire travail termine cette série de tests de détection aussi bien faire référence à des déficits de mémoire (indiqués par 1 essai) et travail des déficits de mémoire (indiqués par essai 2 ou la différence entre l’essai 1 et 2 de procès). Autres mesures de la fonction cognitive incluent le labyrinthe radial de huit bras, le labyrinthe de Barnes, le test de reconnaissance de nouveaux objet et différentes variantes du labyrinthe de l’eau. Ces variations incluent le labyrinthe aquatique de Morris à l’adresse original et le labyrinthe de Lashley III (encore une fois voir Fujimoto et al. 22 et or et al. 23). cette batterie de tests s’est avéré pour être utile tôt après une lésion et, à des degrés divers, à 12 mois après la blessure,1.
En outre, les tâches démontrés ici peuvent être utilisés avec différentes souches, sexe et âge des rats ; Cependant, hébergement devrez peut-être être faite pour différentes tailles et dans le cas d’une plus grande fragilité. Par exemple, les rats plus âgés et plus lourds ont besoin d’un faisceau plus large tâche Balance à plateau et les rats âgés, fragiles, peut ont besoin de plus courte durée des heures de natation dans l’eau labyrinthe. Ainsi, il y a Colocation de flexibilité lors de ces essais et le potentiel pour le développement de nouveaux tests pour tenir compte des hypothèses et des situations différentes.
The authors have nothing to disclose.
Nous remercions Ian Bolding pour l’assistance dans la préparation chirurgicale de sujets et Elizabeth Sumner pour son montage méticuleux. Ces études ont été réalisées dans le cadre d’une équipe financée par The Moody Project pour translationnelle Traumatic Brain Injury Research.
Sprague-Dawley rats | Charles Rivers Laboratories 251 Ballardvale St Wilmington, MA 01887-1096 Phone: 800-522-7287 |
CD-IGS rats, strain code 001 | male, albino, 300-350g at arrival |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Beam-Balance | |||
Beam | home built | wood, 25" l x 1" h x 3/4" w sealed with polyurethane varnish | |
C-clamp | Home Depot | 1422-C | 2 1/2" |
barrier | Home Depot | styrofoam, 18" x 17 1/2" | |
table (for both BB & BW) | generic office supply | 37" h x 30" w x 60" l | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Beam-Walk | |||
Beam | home built | wood 38-1/2" l x 1-3/4" h x 1" w sealed with polyurethane varnish (~ 37" off floor) | |
escape box | home built | woodpainted black 12 1/2 " l x 9" h x 7-1/4" w | |
nails (pegs) | 2" | ||
hinges | |||
clamps | |||
white noise machine | San Diego Instruments 9155 Brown Deer Rd, Suite 8 San Diego, CA 92121 Phone: (858)530-2600 |
http://www.sandiegoinstruments.com/libraries/misc/datasheets/whitenoise.pdf | |
light | Home Depot | ||
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Morris Water Maze | |||
fiberglass pool | manufacturer unknown | ||
(similar to one made by SDI) | San Diego Instruments | 7000-0723 | 72" diameter x 30" deep (~ 500 gal) |
plexiglass platform | hand-made by Maggie Parsley | 10 cm diameter, 26" tall with silicone applied to the surface of the platform to provide a gripping surface | |
(similar to one made by SDI) | SDI | 7500-0272 | |
plexiglass animal boxes w/ lids | UTMB Machine Shop | 2 boxes, 10" w x 16" L x 9" h | |
spot lights/ heat lamps | Home Depot | 3 around pool, 2 over boxes to dry animals | |
AnyMaze | San Diego Instruments 9155 Brown Deer Rd, Suite 8 San Diego, CA 92121 Phone: (858)530-2600 |
/9001 | http://www.sandiegoinstruments.com/any-maze-video-tracking/ |