이 프로토콜은 표적 결합 및 보체 의존성 세포 독성 (CDC) 유도와 같은 리툭시 맵의 두 가지 중요한 기능적 특성 에 대한 시험관 내 비교를 설명합니다. 상기 방법은 기준 리툭시 맵과 리툭시 맵 바이오시 밀러 사이의 일대일 비교를 위해 사용되었다. 이러한 분석법은 바이오시 밀러 개발이나 생산 과정에서의 품질 관리에 사용될 수 있습니다.
치료 용 단일 클론 항체 (모노클로 날 항체)는 암을 포함한 여러 병리 상태의 치료에 적합하다. 제약 회사로 바이오시 밀러 단클론 항체의 개발은 시장 기회이지만, 또한 약물 접근성을 높이고 치료 관련 비용을 절감 할 수있는 전략이다. 여기에 설명 된 프로토콜의 Daudi 세포에서 리툭시 맵과 목표 구속력 CDC 유도 평가를 설명한다. 이들 두 기능은 항체의 다른 영역의 구조를 필요 리툭시 맵에 의해 유도 된 임상 효과에 적합하다. 프로토콜은 기준 리툭시 맵의 좌우 비교 시판 리툭시 맵의 밀러를 허용한다. 평가 된 제품은 기본 물리 화학적 차이가 있음을 시사하고 임상에서 그 차이의 영향을 분석 할 필요성을 강조하는, 표적 결합 및 CDC 유도 모두에서 차이를 보였다. 여기에보고하는 방법은 체외에서 간단하고 저렴한 구성 </ EM> 리툭시 맵 바이오시 밀러의 활동의 평가를위한 모델. 따라서, 그들은 바이오시 밀러 개발시 유용뿐만 아니라, 바이오시 밀러 생산 품질 관리가 될 수 있습니다. 또한, 상기 제시된 방법은 다른 치료 용 모노클로 추정 될 수있다.
치료 항체는 암,자가 면역 및 만성 질환, 신경 학적 장애 등 1 등 다양한 병리의 치료를 위해 개발 된 재조합 단일 클론 항체 (단클론 항체)이다. 현재 FDA는 40 개 이상의 치료 단클론 항체에 대한 승인을 부여하고, 더는 다음 년 만에 시장에 도달 할 것으로 예상된다.
리툭시 맵은 CD20 + B 세포 비호 지킨 림프종 (NHL), CD20 + 여포 성 NHL, 만성 림프 구성 백혈병, 류마티스 관절염 (2, 3)의 치료를 위해 승인 된 높은 친 키메라 단일 클론 항체의 IgG1이다. 리툭시 맵에 의한 B 세포에서 과다 발현되는 CD20의 인식은 아폽토시스를 유도하고; 활성화를 보완; 항체 – 의존성 세포 매개 세포 독성 (ADCC) 3. 이 약의 특허는 2013 년 2016 년 미국 유럽 및 만료각각. 따라서, 제약 회사는 전 세계적으로 리툭시 맵 바이오시 밀러를 개발하고있다. 인간의 소비에 대한 다른 약물과 마찬가지로, 바이오시 밀러는 규제 기관의 승인을 필요로합니다. 국제 가이드 라인은 단클론 항체에 대한 생물학적 동등성이 새로운 레퍼런스 제품 4의 물리 화학적 특성, 약물 동력학, 효능 및 안전성을 비교하여 증명되어야 함을 나타냅니다.
따라서, 이러한 비교에서 사용 된 방법은 모노클로 날 항체의 구조적 및 기능적 특성, 임상 적 관련성 특히 평가한다. 이를 위해, 시험 관내 분석법 (. 채프먼 등 검토) 생체 내 실험을 통해 여러 장점을 보여 5 : ⅰ) 시험관 내 연구에서 제안 된 밀러 제품과 기준의 차이에 민감하다; ⅱ) 생체 내 연구에 많은 모노클위한 중요한 종으로 수행해야비 – 인간 영장류; 및 ⅲ) 작용 기전 임상전 독성, 참조 제품의 임상 효과 때문에 아니라 추가적인 유용한 정보를 제공하지 않을 수 밀러와 생체 내 연구에서, 공지되어있다. 따라서, 바이오시 밀러에 대한 유럽 연합 (EU)의 지침 후보 생체 데이터 만 6 강력한 기반으로 임상 시험을 입력 할 수 있습니다.
여기, 우리는 CD20 + 배양 세포를 사용 리툭시 맵의 생물학적 활성을 평가하는이 빠르고, 경제, 간단한 분석을 제시한다. 이 분석은 리툭시 맵 바이오시 밀러 후보에 대한 비교 동등성의 일부로 포함 할 수있다.
치료 단클론 항체의 특허 만료 바이오시 밀러의 개발을 추진하고 있습니다. 따라서, 이러한 제품의 임상 적 활동의 차이를 식별 할 수있는 간단한 방법이 필요하다. 목표 구속력 CDC 유도 : CD20 + 세포 배양은 리툭시 맵의 두 가지 주요 기능 특성의 평가를 위해 사용 하였다. 후자는 그것의 보수 (9) Fc 영역의 상호 작용에 주로 의존하면서 전자 활성은 항체의 Fab의 영역에 의…
The authors have nothing to disclose.
저자는 인정하지 않습니다.
RPMI-1640 medium | ATCC | 30-2001 | Modify the culture depending on the cell line |
Trypan Blue solution | Sigma | T8154 | 0.4%, liquid, sterile-filtered, suitable for cell culture |
Daudi Burkitt's Lymphoma Cells | ATCC | CCL-213 | You can modify the cell line depending on the antibody of interest |
Fetal bovine serum(FBS) | GIBCO | 16000-044 | You can modify the source of serum depending of requirements of the cell line |
Normal Human Serum Complement | Quidel | A113 | It is therefore appropriate for use in biocompatibility experiments including drug development, biomaterials testing and other applications |
7AA-D | BDPharmigen | 559925 | You can use broad range of color options, compatible with most instrument configurations for to analyze viability. |
PECy5 Mouse Anti-human IgG | BDPharmigen | 551497 | Change fluorochrome depending on the filter and laser of your flow cytometer. |
Human IgG Isotype Control | ThermoFisher Scientific | 07-7102 | Change depending to mAb |
BDCytofix | BDPharmigen | 554655 | Flow Cytometry Fixation Buffer (1-4% formaldehyde or paraformaldehyde ) |
PBS pH 7.4 10X (Phosphate buffer saline) | GIBCO | 70011-044 | Phosphatebuffer without Ca2+/Mg2+ [137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 8 mM Na2HPO4, 1.46 mM KH2PO4] and endotoxin free. |
Cell culture plates 96 well, V-bottom | Corning | 29442-068 | 12 x 75 mm round bottom test tubes or 96-well V- or U- bottom microtiter plates |
MabThera (Rituximab) | Roche | — | Reference product |
Rituximab | Indian | — | Biosimilar product |
15- or 50-mL conical centrifuge tubes | Corning | 430290 or 430052 | — |
Pipette Tips | Eppendorf | — | Multiple volume configurations are necessary |
Pipettes | Eppendorf | — | Adjustable-volume pipettes are necessary |
Centrifuge 5430/ 5430R model | Eppendorf | — | Refrigerated variable-speed centrifuge (4 to 25 ° C) with speeds ranging from 10 to 30,130 × g |
Flow cytometer | BD Dickinson | — | BD FACSAria III or other flow cytometer |
Olympus optical and light microscope | Olympus | — | To quantify and evaluate cell growth |
Incubator | SANYO | — | Incubatorfor temperature andCO2 control to culture cells |
Biological Safety Cabinet | CHC BIOLUS | — | Biological safety cabinet that is used to protect the researcher, product and environment. |