시스테인 잔류 물을 용매 접근성에 대한 분석<em> 옥수수 rayado fino 바이러스</em에서 생산> 바이러스 같은 입자<em> Nicotiana benthamiana</emVLPs에 펩티드의> 식물과 교차 연결
Summary
의 시스테인 잔류의 thiol 그룹의 용매 접근성을 분석하는 방법<em> 옥수수 rayado fino 바이러스</em펩타이드 가교 반응에 이어> (MRFV) 바이러스 같은 입자 (VLPs)이 설명되어 있습니다. 방법은 특정 반응에 타겟이 될 수있는 VLPs의 표면에 여러 화학 그룹의 가용성을 활용합니다.
Abstract
바이러스 속성과 물리 및 물리적 특성을 모방하고 활용하는 것은 세계에서 가장 급박 한 문제 중 일부에 대한 해결책을 제공 할 약속을 보유하고 있습니다. 깎아 지른듯한 범위와 자신의 흥미 특성과 결합 바이러스의 종류는 잠재적으로 바이러스 기반 기술의 응용 프로그램 끊임없는 기회를 제공합니다. 바이러스는 온도와 pH의 조건의 다양한 미만의 이산 모양과 크기, 대칭의 특이성, polyvalence, 안정적인 특성을 가진 입자로 자기 조립 할 수있는 능력을 갖추고 있습니다. 당연히, 속성의 이러한 놀라운 범위, 바이러스는 biomaterials 9, 백신 14, 15, 전자 재료, 화학 도구 및 분자 전자 컨테이너 4, 5, 10, 11, 16, 18, 12에 사용하기 위해 제안합니다.
나노 기술에 바이러스를 이용하기 위해, 그들은 새로운 기능을 가르친다하기 위해 자연적인 형태에서 수정해야합니다. 이 도전 홍보ocess는 유전 바이러스 게놈의 수정 및 화학적으로 바이러스 입자 반응 그룹 8 외국인 또는 원하는 분자를 부착 등 여러 가지 메커니즘을 통해 수행 할 수 있습니다. 바이러스를 수정하는 기능은 주로 바이러스의 physiochemical과 물리적 특성에 따라 달라집니다. 또한, 유전자 또는 physiochemical 수정에 나쁜 바이러스 기본 구조 및 바이러스 기능에 영향을주지 않고 수행해야합니다. 옥수수 rayado fino 바이러스 (MRFV) 코트 단백질은 단백질 단백질에 의해 안정화 아르 안정적이고 빈 VLPs을 생산 대장균에 자기 조립 상호 작용하고는 바이러스 기반 기술 응용 프로그램 8에서 사용할 수 있습니다. 담배 공장에서 생산 VLPs는 펩티드의 다양한 종류의 covalently 13 표시 할 수있는 발판으로 조사되었다. 여기, 우리는 바이러스 capsid에있는 용매의 접근이 cysteines 어떤이 modifi 사용할 수 있습니다 결정) 1 단계를 설명양이온, 그리고 2) 수정 capsids에 펩티드를 bioconjugate. 네이티브 또는 mutationally – 삽입 아미노산 잔류 물 및 표준 커플 링 기술을 사용하여 재료의 다양한 종류 등 Brome 모자이크 바이러스 3, 카네이션의 반점 바이러스 12 Cowpea chlorotic 반점 바이러스 6, 담배 모자이크와 같은 식물 바이러스의 표면에 표시되어 바이러스 17, 순무 대가리 노란색 모자이크 바이러스 1, MRFV 13.
Protocol
Representative Results
Discussion
여기에 제시된 방법은 공장 제작 VLPs의 표면에뿐만 아니라 다른 단백질 단지에 존재 반응 cysteines 매우 민감하고 빠른 분석이 가능합니다. Maleimides 안정적인 thioether 채권을 형성하기 위해 무료로 설프 하이 드릴 함유 분자와 반응하여 thiol 특정 시약입니다. 이 방법은 다른 아미노산과 상호 작용에 관여하지 설프 하이 드릴 그룹과 반응 할 수있는 maleimides의 특이성에 그립니다. VLPs의 기본 구조…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalog number | Comments |
| Thinwall, Ultra-Clear Tubes | Beckman | 344059 | |
| mMESSAGE mMACHINE T7 Kit | Life Tecnologies | AM1344M | |
| Fluorescein-5-Maleimide | Thermo Scientific Life Technologies | 46130 F150 | 46130 is out of order substitute with F150 |
| Pierce Biotin Quantitation Kit | Thermo Scientific | 28005 | |
| EZ-Link Maleimide-PEG2-Biotin, No-Weigh Format | Thermo Scientific | 21901 | |
| SM(PEG)n Crosslinkers | Thermo Scientific | 22107 | |
| 10-20% Tris-Glycine gel | Invitrogen | EC61352 | |
| Laemmli Buffer | Bio-Rad | 1610737 | |
| Tris Glycine SDS Running Buffer | Invitrogen | LC2675 | |
| Tris Glycine Transfer Buffer | Invitrogen | LC3675 | |
| Nitrocellulose Membrane Filter Paper Sandwich | Invitrogen | LC2001 | |
| Phosphatase Labeled Affinity Purified Antibody to Rabbit IgG | Kirkegaard and Perry Laboratories | 0751516 | |
| NBT/BCIP Phosphatase Substrate | Kirkegaard and Perry Laboratories | 508107 |
References
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