通过使用所描述的方法分离和鉴定人牙髓干的细胞(hDPSCs)<strong酶解浆(DPSC-ED)</strong>或<strong的直接产物牙髓组织的外植体干细胞(DPSC-OG)。接着</strong><em在体外</em这两种类型的hDPSCs>比较分化成成牙本质细胞。
干细胞是细胞克隆细胞具有两个显着的特点,被称为多潜能和自我更新15。在所有的干细胞不同的复制效力,牙齿干细胞的产后干细胞引起的关注,近年来,因为其可访问性,可塑性强,高增殖能力比较与其他成体干细胞16。典型地,类似的间充质干细胞,牙髓干细胞粘附的克隆形成有多个成间充质细胞的分化能力和/或非间充质细胞谱系,无论是在体外和体内的细胞,这些细胞。1-8,17,18稳干细胞鉴定阴性表达造血抗原( 如 CD45,CD34,CD14),阳性表达的CD90,CD29,CD73,CD105,CD44和STRO-1。19,20
容易获得潜在的疼痛和发病率最低,作为一个有价值的人DPSCS能源间充质干细胞相比普通的来源,如骨髓间充质干细胞21。在一般情况下,稳干细胞已被分离由任何生长的方法, 即 ,从的牙髓组织外植体(DPSC-OG)22-24,和/或酶消化4,6,25(DPSC-ED)的干细胞的迁移。以往的研究表明,隔离方法和培养条件下,可以吸引不同的人群或谱系体外通道26,27。在的箱子恒牙(pDPSCs),Huang 等人透露,酶消化pDPSCs超越全部牙髓之中相比,有较高的增殖潜力,26此外,在箱子乳牙(dDPSCs),它表明一个STRO-1及CD34的标记表示在比较更多的dDPSC-ED与dDPSC-OG。此外,dDPSC-ED显示定义的骨/ odonto介质的高矿化率在27因此,由于出色的潜力DPSCS在regenerative药,将有更多的研究,以更好地了解可能来自不同的隔离方法不同人群的需要。
在这里,它是尝试引入纸浆提取的简单的方法,通过使用一步牙科金刚石盘以方便处理纸浆提取。此外,在申请ED或OG方法的人牙髓源性干细胞的分离,两组间的一般特性及分化能力进行了调查。
该协议描述了hDPSCs牙髓使用两种方法,酶解和牙髓组织的外植体干细胞的直接产物的分离和鉴定。此外, 在这些细胞的体外分化成成牙本质细胞,通过茜素红S的定量测定&QPCR评估。
现有的协议,用于隔离从人类牙齿的牙髓组织已被用于各种仪器,如钳子(骨镊子)9,摘除手术中,针29,格雷西刮匙30,牙科裂缝毛刺4,等,这些方法是?…
The authors have nothing to disclose.
我们非常感谢博士的莱拉Shakeri博士阿雷夫Dournaei的关键铁饼和穆罕默德·礼萨·哈德姆谢里夫先生为他的技术支持。
Name of the reagent | Company | Catalogue or Lot. number | Comments (optional) |
α-MEM | GIBCO | 11900-073 | |
Collagenase type I | Sigma-Aldrich | C0130-100MG | |
Dispase | GIBCO | 17105-041 | |
Penicillin/streptomycin | GIBCO | 15140-122 | |
Amphotericin B | GIBCO | 15290-018 | |
Fetal Bovine serum defined (FBS) | HyClone | SH30070.03 | |
L-ascorbic acid 2-phosphate | Sigma | A8960-5G | |
L-glutamine | GIBCO | 25030-024 | |
Dexamethasone | Sigma | D4902 | |
β-Glycerol phosphate disodium salt hydrate, BioUltra | Sigma | G9422-100G | |
Potassium phosphate monobasic | Sigma-Aldrich | P5655 | |
Osteogenesis Assay Kit | Millipore | PS01802031 | |
Mouse IgG2b-PE isotype control | BD pharmingen | 50808088029 | |
FITC mouse IgG2b isotype control | BD pharmingen | 559532 | |
FITC mouse IgG1 κ isotype | BD pharmingen | 11471471 | |
FITC/PE mouse anti-human CD34/CD45 | BD pharmingen | 341071 | |
PE anti-human CD146 | BD pharmingen | 550315 | |
Monoclonal mouse anti-human CD90/FITC | Daka | 00034418 | |
PE mouse anti-human CD73 | BD pharmingen | 550257 | |
Anti-h CD105/Endoglin PE | BD pharmingen | FAB10971P | |
PE mouse anti-human CD11b/Mac1 | BD pharmingen | 5553888 | |
CD44 PE mouse anti human | BD pharmingen | 555479 | |
Phosphate buffer Solution (PBS) | GIBCO | 003000 | |
70-μm cell strainer | Falcon | 352360 | |
0.2 μm syringe filter | Millex-GV | SLGV033RB | |
25 cm2 culture flask | Sigma-Aldrich | Z707481 | |
EQUIPMENT | |||
BD FACSCalibur | BD | 342975 | |
multiskan microplate spectrophotometer | Thermo scientific | 51119200 | |
Fleurcense Microscope | Olympus | ||
Flowing Software version 2.3.1 |