وصف طريقة العزلة وتوصيف الخلايا الجذعية البشرية الأسنان اللب (hDPSCs) باستخدام إما<strong> التفكك الأنزيمية من عجائن (DPSC-ED)</strong> أو<strong> ثمرة مباشرة للخلايا الجذعية من الأنسجة إإكسبلنتس اللب (DPSC-OG). ثم تليها</strong><em> في المختبر</em> التمايز النسبية لكلا النوعين من hDPSCs في odontoblasts.
الخلايا الجذعية هي خلايا مولد الرمع التي تمتلك اثنين من الميزات الرائعة، والمعروفة باسم قوة متعددة والتجديد الذاتي 15. بين جميع الخلايا الجذعية مع الفعاليات المختلفة تنسخي، وضعت الخلايا الجذعية الأسنان والخلايا الجذعية بعد الولادة الاهتمام في السنوات الأخيرة بسبب إمكانية الوصول إليها، اللدونة، وقدرة عالية التكاثري بالمقارنة مع غيرها من الخلايا الجذعية البالغة 16. مميز، على غرار الخلايا الجذعية الوسيطة، طب الأسنان الخلايا الجذعية هي لب الخلايا الملتصقة مولد الرمع التي لها قدرة التمايز متعددة في اللحمة المتوسطة و / أو غير اللحمة المتوسطة الأنساب، سواء في التجارب المختبرية والحية. يتم تحديد 1-8،17،18 DPSCs من قبل من التعبير السلبي للمستضدات المكونة للدم (مثل CD45، CD34، CD14)، والتعبير الإيجابي للCD90، CD29، CD73، CD105، CD44 وSTRO 1-. 19،20
من السهل الحصول عليها مع احتمال الألم والمرض جعل الحد الأدنى DPSCs الإنسان باعتبارها valuمصدر من اللجان الدائمة قادرة بالمقارنة مع مصادر العادية، مثل خلايا نخاع العظام الجذعية الوسيطة 21. بشكل عام، تم عزلها من قبل أي من DPSCs طريقة ثمرة، أي هجرة الخلايا الجذعية من الأنسجة إإكسبلنتس اللب (DPSC-OG) 22-24، و / أو عن طريق الهضم الأنزيمي (DPSC-ED) 4،6،25. وقد أظهرت الدراسات السابقة أن طريقة العزل وظروف التربية يمكن أن تحدث السكان تحت الأنساب مختلفة أو في الممرات المختبر 26،27. في حالة الأسنان الدائمة (pDPSCs)، كشفت هوانغ آخرون أن الأنزيمية pDPSCs هضمها وارتفاع احتمال انتشار بالمقارنة مع DPSCs تجاوزت 26 وعلاوة على ذلك، في حالة الأسنان اللبنية (dDPSCs)، وقد تبين أن STRO-1 و CD34 وأعرب علامات اكثر في dDPSC-ED بالمقارنة مع dDPSC-OG. وبالإضافة إلى ذلك، عرض dDPSC-ED أعلى معدل تمعدن العظم في المتوسط / odonto تعريف 27 لذلك، ونظرا لإمكانية ممتازة من DPSCs في مجال البحثالطب egenerative، وسوف تكون هناك حاجة لمزيد من الدراسات لفهم أفضل لمختلف السكان المحتملة التي هي مستمدة من أساليب العزل المختلفة.
هنا، كان محاولة لإدخال طريقة سهلة لاستخراج اللب، وذلك باستخدام خطوة واحدة القرص الماس الأسنان لتسهيل عملية استخراج اللب. وعلاوة على ذلك، بعد عزل الخلايا الجذعية البشرية المستمدة من اللب من خلال تطبيق أساليب ED أو OG، كما تم بحث خصائص وقدرات عامة التفريق بين مجموعتين.
هذا البروتوكول يصف عملية عزل وتوصيف hDPSCs من لب الأسنان باستخدام طريقتين، والتفكك الأنزيمية ثمرة مباشرة للخلايا الجذعية من الأنسجة إإكسبلنتس اللب. وبالإضافة إلى ذلك، في تمايز المختبر من هذه الخلايا في odontoblasts، تم تقييم من قبل فحص كمية الصبغ الأحمر الأحمر S &…
The authors have nothing to disclose.
نحن نعترف بامتنان الدكتورة ليلى شاكري والدكتور عارف Dournaei لرمي انتقاداتهم والسيد محمد رضا شريف خادم للدعم الفني له.
Name of the reagent | Company | Catalogue or Lot. number | Comments (optional) |
α-MEM | GIBCO | 11900-073 | |
Collagenase type I | Sigma-Aldrich | C0130-100MG | |
Dispase | GIBCO | 17105-041 | |
Penicillin/streptomycin | GIBCO | 15140-122 | |
Amphotericin B | GIBCO | 15290-018 | |
Fetal Bovine serum defined (FBS) | HyClone | SH30070.03 | |
L-ascorbic acid 2-phosphate | Sigma | A8960-5G | |
L-glutamine | GIBCO | 25030-024 | |
Dexamethasone | Sigma | D4902 | |
β-Glycerol phosphate disodium salt hydrate, BioUltra | Sigma | G9422-100G | |
Potassium phosphate monobasic | Sigma-Aldrich | P5655 | |
Osteogenesis Assay Kit | Millipore | PS01802031 | |
Mouse IgG2b-PE isotype control | BD pharmingen | 50808088029 | |
FITC mouse IgG2b isotype control | BD pharmingen | 559532 | |
FITC mouse IgG1 κ isotype | BD pharmingen | 11471471 | |
FITC/PE mouse anti-human CD34/CD45 | BD pharmingen | 341071 | |
PE anti-human CD146 | BD pharmingen | 550315 | |
Monoclonal mouse anti-human CD90/FITC | Daka | 00034418 | |
PE mouse anti-human CD73 | BD pharmingen | 550257 | |
Anti-h CD105/Endoglin PE | BD pharmingen | FAB10971P | |
PE mouse anti-human CD11b/Mac1 | BD pharmingen | 5553888 | |
CD44 PE mouse anti human | BD pharmingen | 555479 | |
Phosphate buffer Solution (PBS) | GIBCO | 003000 | |
70-μm cell strainer | Falcon | 352360 | |
0.2 μm syringe filter | Millex-GV | SLGV033RB | |
25 cm2 culture flask | Sigma-Aldrich | Z707481 | |
EQUIPMENT | |||
BD FACSCalibur | BD | 342975 | |
multiskan microplate spectrophotometer | Thermo scientific | 51119200 | |
Fleurcense Microscope | Olympus | ||
Flowing Software version 2.3.1 |