De verwoesting van de graangewassen door zaad-infecterende schimmels heeft ertoe geleid dat tal van onderzoeksinspanningen om beter te begrijpen plant-pathogeen interacties. Om zaad-schimmel interacties in een laboratorium te bestuderen, ontwikkelden we een robuuste methode voor de kwantificering van de schimmel reproductie, biomassa en verontreiniging met mycotoxinen met behulp van kernel bioassays.
Het rotten van granen door zaad-infecteren schimmels vormt een van de grootste economische uitdagingen voor graanproductie de hele wereld, niet aan ernstige risico's te vermelden mens en dier. Onder de productie van graan, maïs is waarschijnlijk de meest getroffen gewas, als gevolg van pathogenen geïnduceerde verliezen in graan integriteit en de mycotoxine zaad besmetting. De twee meest voorkomende en problematisch mycotoxinen voor maïs telers en levensmiddelen en diervoeders processors zijn aflatoxine en fumonisine, geproduceerd door Aspergillus flavus en Fusarium verticillioides, respectievelijk.
Recente studies in de moleculaire plant-pathogeen interacties hebben aangetoond belofte in het begrijpen van specifieke mechanismen in verband gebracht met plantaardige reacties op schimmelinfecties en verontreiniging met mycotoxinen 1,2,3,4,5,6. Omdat veel labs gebruikt kernel assays van planten-pathogeen interacties te bestuderen, is er behoefte aan een gestandaardiseerde methode voor het kwantificeren verschillende biologische parameters, zodatde resultaten van verschillende laboratoria kan worden cross-geïnterpreteerd. Voor een robuuste en reproduceerbare middelen voor kwantitatieve analyses op zaden, hebben we in-lab kernel testen en de daarop volgende methoden om schimmelgroei, biomassa en verontreiniging met mycotoxinen te kwantificeren. Vier gesteriliseerd maïskorrels worden geïnoculeerd in glazen flacons met een schimmel suspensie (10 6) en gedurende een vooraf bepaalde periode. Monsterflesjes worden vervolgens geselecteerd voor de telling van conidia van hemocytometer, ergosterol biomassa op analyse van hoge prestatie vloeistofchromatografie (HPLC), aflatoxine kwantificering met een AflaTest fluorometer methode en fumonisine kwantificering van HPLC.
The authors have nothing to disclose.
We willen graag Brandon Hassett en Carlos Ortiz bedanken voor hun technische bijstand. Dit werk werd ondersteund door de NSF subsidies IOB-0544428, IOS-0951272, en IOS-0925561 Dr Michael Kolomiets, en door de USDA Nationaal Instituut voor Voedsel-en Landbouworganisatie (NIFA), AFRI Plantenveredeling en onderwijs Grant # 2010 tot 85.117 -20.539 naar Drs. Seth Murray, Thomas Isakeit, en Michael Kolomiets.
Name of the reagent | Company | Catalog # |
Potato Dextrose Agar | Fisher Scientifc | S71659A |
Tween-20 | Fisher Scientifc | BP337-100 |
Plastic incubation container | Sterilite | 1713LAB06 |
Blender | Vicam | 20200 |
24 cm Fluted Filter Papers | Vicam | 31240 |
1.5 μm glass microfibre | Vicam | 31955 |
Afla Test column | Vicam | G1024 |
Afrla Test Developer | Vicam | 32010 |
Methanol | Vicam | 35016 |
Acetonitrile | Fisher Scientifc | AC14952-0025 |
Ethanol | Fisher Scientifc | AC39769-0025 |
C-18 solid phase extraction column (Prep SEP SPE C18 Column) | Fisher Scientifc | 60108-304 |
O-phthalaldehyde (OPA) | Sigma Chemical Co | 79760-5g |
Boric acid | Fisher Scientifc | BP168-500 |
Sodium borate | Fisher Scientifc | RDCS0330500 |
Mercaptoethanol | Fisher Scientifc | 45-000-231 |
Shimadzu HPLC LC-20AT (Pump) | Shimadzu Scientific Instruments, Inc. | LC-20AT |
Zorbax ODS column (4.6x150mm) | Agilent Technologies | 443905-902 |
Shimatzu RF-10Axl fluorescence detector | Shimadzu Scientific Instruments, Inc. | RF-10AXL |
Sodium phosphate | Fisher Scientifc | AC38987-0010 |
FB1 standards | Sigma Chemical Co. | F1147-1mg |
Chloroform | VWR | MK444410 |
13 mm syringe filter with 0.45 um nylon membrane (HPLC) | Pall Life Science | 4426 |
Ergosterol | Sigma-Aldrich | 45480-50G-F |
Scintillation vials | VWR | 66021-602 |
Sodium Chloride | Vicam | G1124 |