招聘循环白细胞从血液流至发炎组织是一个重要和复杂的炎症 1,2的过程。在postcapillary静脉发炎组织,白细胞初步系绳上的小静脉壁壁面和滚动。滚动内皮细胞白细胞逮捕,并接受公司的附着力小静脉表面的趋化因子或其他趋化因子。搬迁许多粘附白细胞粘附在血管内皮细胞的交界外渗网站从最初的网站,这个过程被称为腔内爬行 3 。白细胞爬行,跨越内皮细胞(轮回)和血管外组织迁移朝来源的趋化因子(趋化)4。活体显微镜是一个强大的工具,在体内的白细胞-内皮细胞相互作用的可视化和细胞和分子机制揭示白细胞招聘2,5。在这份报告中,我们提供了一个全面的描述使用明活体显微镜,可视化,并确定在中性粒细胞在小鼠提睾肌的招聘的详细过程,中性粒细胞趋化梯度。为了诱导中性粒细胞的招聘,小块的琼脂糖凝胶(〜1毫米大小),其中包含中性粒细胞趋化MIP – 2(CXCL2,CXC趋化因子)或WKYMVm(色氨酸,赖氨酸,酪氨酸- VAL – D -蛋氨酸,一种人工合成的模拟细菌转肽)是放在毗邻postcapillary观察到的微静脉的肌肉组织。随着时间已过视频摄影和计算机软件ImageJ,内皮细胞,中性粒细胞transendothelial的迁移和组织中的迁移和趋化中性粒细胞腔内爬行可视化和跟踪。此协议允许腔内的爬行速度,轮回的时间,脱离时间,迁移速度,趋化速度,趋化指数在组织很多,如中性粒细胞的招聘参数,可靠和定量分析。我们证明,使用此协议,这些中性粒细胞招聘参数可以稳定的决心和方便地跟踪体内的单个细胞运动。
Xu, N., Lei, X., Liu, L. Tracking Neutrophil Intraluminal Crawling, Transendothelial Migration and Chemotaxis in Tissue by Intravital Video Microscopy. J. Vis. Exp. (55), e3296, doi:10.3791/3296 (2011).