弓形虫囊肿的形式,在应对环境压力,可在组织培养模式模仿的转换。本视频演示了技术审查囊肿壁的形成,激活骨髓来源的巨噬细胞或改变成纤维细胞生长介质的pH值。
弓形虫是一种专性细胞内寄生虫能侵入任何温血动物有核细胞。在感染,T。弓形虫传播作为一种快速复制的形式被称为速殖子。速殖子转换成一个缓慢增长的囊称为一个信号的过程,是没有很好的特点bradyzoite的形式。 bradyzoite囊肿内的动物,被发现在中枢神经系统和肌肉组织和代表的慢性感染阶段。可以进行模拟转换到bradyzoites在组织培养中的CO 2饥饿,使用高pH值,或增加干扰素γ(IFNγ)的媒介。 Bradyzoites的特点是存在一个囊肿壁,其中的凝集素的Dolichos biflorus凝集素(DBA)结合。荧光标记的DBA是用于可视化的囊壁在人包皮成纤维细胞(HFFS)已暴露在低CO 2和高pH值介质中生长的寄生虫。同样,寄生虫居住在小鼠骨骨髓来源的巨噬细胞(BMMs)显示囊肿壁由DBA的检测γ干扰素和脂多糖(LPS)激活后的楼宇管理维修综合计划“。此协议将演示如何诱导T 的转换弓形虫到低的CO 2和楼宇管理维修综合计划“激活使用高pH值增长介质的bradyzoites。宿主细胞培养上盖玻片,与速殖子感染,要么与γ干扰素和脂多糖(BMMs)此外激活或暴露于高pH值生长介质三天(HFFS)。宿主细胞的感染完成后,将固定,通透,并阻止。囊壁将使用荧光显微镜罗丹明DBA的可视化。
虽然bradyzoite发展的机制尚不完全清楚,T的分子遗传分析弓形虫在组织培养的阶段转换,导致在 2,3,4 bradyzoite囊肿形成有关的基因的发现。也导致了一些bradyzoite标记其他长期胁迫条件下,包括在激活的巨噬细胞的增长 5,6的表达观察分析。上面的方法描述了如何成长T 。 弓形虫诱导发展一个DBA的积极骨髓细胞和HFFS囊肿壁结构。这些结果突出,囊肿发展途?…
The authors have nothing to disclose.