このプロトコルは、KLRG1リガンドの分析のための強力なツールですKLRG1四量体、の製造を説明します。
キラー細胞レクチン様受容体のG1(KLRG1)はC型レクチン様スーパーファミリーに属するII型膜貫通糖タンパク質抑制性受容体である。 KLRG1は、モノマーとして、及びジスルフィド結合ホモダイマーとしても存在する。このよく保存された受容体は、最も成熟し、最近では活性化NK細胞だけでなく、エフェクター/メモリーT細胞のサブセットに記載されています。
KLRG1四量体だけでなく、他の方法を使用して、E -、N -、およびR -カドヘリンはKLRG1リガンドとして同定された。これらのCa 2 +依存性細胞間接着分子は細胞間相互作用、膜貫通ドメインとアクチン細胞骨格にリンクされている細胞質ドメインの責任fiveカドヘリンリピートを含む細胞外ドメインで構成する。
KLRG1四量体の生成はKLRG1リガンドの同定に不可欠でした。 KLRG1四量体はまた、免疫応答と組織の整合性の調節に役割のカドヘリンとKLRG1プレイを解明するユニークなツールです。
このプロトコルでは、ビオチニル化する、精製する方法が示され、tetramerize KLRG1ている。 KLRG1四量体はフローサイトメトリーでKLRG1リガンドを標識するために使用することができます。リフォールディング条件は各タンパク質のために経験的にテストされる必要があるものの、他のC型レクチンは、同様のプロトコルを使用してtetramerizedすることができます。プローブとしてtetramerizedタンパク?…
我々は、リフォールディング条件を最適化することで助けを博士Naidenkoに感謝。この作品は、ローランBrossayにNIHの研究助成金AI58181によってサポートされていました。シンディあるbanhはNIH NRSA F31 AI080230によってサポートされています。
ステファニーTerrizziとシンディあるbanhはこの作品にも同様に寄与する。