Описание вирус-индуцированного генов (VIGS) метод нокдауна экспрессии генов в<em> Nicotiana benthamiana</em> И помидор.
РНК-интерференция (RNAi) является весьма специфический ген глушителей явление вызвано дсРНК 1. Это глушителей механизм использует два основных класса регуляторов РНК: микроРНК, которые производятся из не-гены белков и короткий вмешательства РНК (siRNAs). Растения используют РНК-интерференции для контроля транспозонов и оказывать жесткий контроль за развитием процессов, таких как образование цветка и листьев орган развития 2,3,4. Растения также используют РНК-интерференции, чтобы защитить себя от заражения вирусами. Следовательно, многие вирусы эволюционировали супрессоры генов, чтобы их успешной колонизации хозяина 5.
Вирус-индуцированные генов (VIGS) представляет собой метод, использующий преимущества завода RNAi-опосредованной противовирусных защитный механизм. В растениях инфицированных вирусами немодифицированные механизм специально направлены против вирусного генома. Однако в связи с вирусом переносчиков последовательности основе хост генов, процесс может быть дополнительно направлены против соответствующих мРНК хозяина. VIGS был приспособлен для высокой пропускной способности функциональной геномики растений, используя завод патогена tumefaciens Agrobacterium, чтобы поставить, через свой Ti плазмиды, рекомбинантный вирус проведение всей или части гена предназначен для глушителей. Системная распространения вирусов и эндогенных завод RNAi техники заботиться об остальном. dsRNAs соответствующих генов-мишеней производится, а затем расщепляется рибонуклеазы Dicer в siRNAs от 21 до 24 нуклеотидов в длину. Эти siRNAs в конечном итоге руководство РНК-индуцированного глушителей комплекса (RISC) деградировать целевой стенограммы 2.
Различные векторы были заняты в VIGS и один из наиболее часто используемых на основе вируса табачной погремушкой (ТРВ). TRV является двудольным вируса и, таким образом, две различные А. tumefaciens штаммы используются для VIGS. Один несет pTRV1, который кодирует репликации и движения вирусные функции в то время как другие, pTRV2, гавани белковой оболочки и последовательность, используемая для VIGS 6,7. Прививка Nicotiana benthamiana и рассады томатов со смесью обоих штаммов приводит к генов. Отключение от эндогенных фитоинов десатуразу (ПДС) гена, который вызывает фотообесцвечивания, используется в качестве контроля за эффективностью VIGS. Следует отметить, однако, что в томатном глушителей, как правило, менее эффективны, чем у N. benthamiana. РНК стенограммы обилие интересующего гена всегда должна быть измерена, чтобы целевой ген эффективно было вниз регулируется. Тем не менее, гетерологичных последовательностей генов из N. benthamiana может быть использована, чтобы заставить замолчать их ортологи в томатном и наоборот 8.
Вирус-индуцированные генов является метод, который позволяет быстро обратный генетический экранов. Он избегает поколения Т-ДНК или транспозонов опосредованной генной заглушками, которые доступны только в некоторых растениях, как Arabidopsis и кукурузы. Он также обходит трудоемкий пр?…
Мы благодарим д-р Патриция Manosalva для нее ценную информацию о рукописи. Финансирование было предоставлено Национальным научным фондом генома растений Программы, награда число DBI-0605059.