病毒诱导的基因沉默(VIGS)的基因表达击倒在方法的说明<em>烟草benthamiana</em>和西红柿。
RNA干扰(RNAi)是一个非常具体的的由双链RNA 1引发的基因沉默的现象。这沉默机制使用RNA的监管的两大类:小分子RNA,这是从非蛋白质编码基因和短干扰RNAs(siRNAs)。植物利用RNAi技术来控制转座子和发挥对发育过程中,如花器官的形成和叶的发展 2,3,4的严格控制。植物也利用RNA干扰抵御感染病毒本身。因此,许多病毒已经进化的基因抑制基因沉默,让他们成功定植其主机5。
病毒诱导的基因沉默(VIGS)是一种方法,它利用植物RNAi介导的抗病毒防御机制。在未修改病毒感染的植物的机制是专门针对病毒的基因组。然而,与病毒载体携带来自宿主基因的序列,这个过程可以额外针对相应的主机的mRNA。 VIGS已适应高通量功能基因组学在植物使用的植物病原农杆菌提供,通过其Ti质粒,重组病毒携带整个或部分沉默针对性的基因序列。全身病毒的传播和内源性植物RNAi的机械,其余的照顾。相应的靶基因的dsRNAs生产,然后到21至24个核苷酸的siRNA的核糖核酸酶Dicer的切割。这些siRNAs最终指导的RNA诱导的沉默复合体(RISC)降解目标成绩单2。
在VIGS已采用不同载体和最常用的是基于对烟草脆裂病毒(TRV)。 TRV是一个双边的病毒,正因为如此,两个不同的答农杆菌株用于VIGS。其中一个进行pTRV1,而另一方面,pTRV2,港口的外壳蛋白和用于VIGS 6,7序列编码的病毒复制和运动功能。接种benthamiana烟草和番茄幼苗混合两种菌株在基因沉默的结果。内源性的八氢番茄红素脱氢酶(PDS)的基因,这将导致漂白,沉默是用来作为VIGS的效率控制。但是,应该指出,在番茄的沉默通常小于 N中的有效benthamiana。应始终感兴趣的基因的RNA转录本丰度测量,以确保有效地被下调的靶基因。然而,从北外源基因序列benthamiana可以用他们各自的同源基因沉默番茄,反之亦然8。
病毒诱导的基因沉默是一种方法,允许快速反向遗传筛选。它避免了新一代的T – DNA或转座子介导的基因敲除,这是只有在某些植物如拟南芥和玉米。它也避开了厂房改造耗时的过程,并允许针对多个基因在同一时间,只要他们有足够的同源性10或不同的主机上的靶序列,同时安排在沉默载体6,11 。
然而,沉默是没有100%有效,因此,必须小心解释结果…
我们感谢她的手稿上的有价值的见解博士帕特里夏Manosalva。经费是由美国国家科学基金会植物基因组计划,获奖数量DBI – 0605059。