ウイルス誘導ジーンサイレンシング（VIGS）でタバコbenthamianaとトマト

Summary

ノックダウン遺伝子発現の内のウイルス誘発性遺伝子サイレンシング（VIGS）メソッドの説明<em>タバコbenthamiana</em>とトマト。

Abstract

RNA干渉（RNAi）は、dsRNAの¹によって引き起こさ非常に特異的な遺伝子サイレンシングの現象です。マイクロRNA、非蛋白質をコードする遺伝子と短い干渉RNA（siRNA）から生成されています：このサイレンシング機構は、RNAのレギュレータの2つの主要なクラスを使用しています。植物は、トランスポゾンを制御するため、および花の器官形成と葉の開発^2,3,4などの発達過程を厳密にコントロールを発揮するために、RNAiを使用してください。植物はまた、ウイルスによる感染から身を守るために、RNAiを使用してください。その結果、多くのウイルスはその宿主⁵の彼らの成功した植民地化を可能にするためにサイレンシング遺伝子の抑制を進化させてきた。

ウイルス誘発性遺伝子サイレンシング（VIGS）は、植物RNAiによる抗ウイルス防御機構を利用する方法です。変更されていないウイルスに感染した植物では機構は、特にウイルスのゲノム比較対象としています。しかし、ホストの遺伝子由来の配列を有するウイルスベクターを用いて、プロセスはさらに、対応するホストのmRNAを対象とすることのできる。 VIGSは、プラスミド、そのチタン、全体またはサイレンシングの対象となる遺伝子配列の一部を担持する組換えウイルスを介して、配信するために植物病原体アグロバクテリウムツメファシエンスを使用して、植物におけるハイスループットゲノム機能解析に適応されています。全身性ウイルスの拡散と内生植物のRNAi機構は、残りの世話をする。標的遺伝子に対応するdsRNAは長さ21〜24ヌクレオチドのsiRNAへのリボヌクレアーゼのダイサーによって生成され、その後切断されています。これらのsiRNAは最終的にターゲット転写物^2を分解するRNA誘導サイレンシング複合体（RISC）を導く。

異なるベクターはVIGSで採用されていると、最も頻繁に使用されるのいずれかがタバコ茎えそウイルス（TRV）に基づいています。 TRVは、二分ウイルスであり、そのような、二つの異なるAとしてツメファシエンス株は 、VIGSに使用されます。一つは、pTRV2、他のコートタンパク質とVIGS ^6,7のために使用されるシーケンスを庇護しながら複製し、動きのウイルスの機能をコードpTRV1を、運びます。遺伝子サイレンシングの菌株の結果、両方の混合物とタバコbenthamianaとトマトの苗を接種。退色の原因内因性フィトエンデサチュラーゼ（PDS）遺伝子のサイレンシングは、VIGSの効率のためのコントロールとして使用されます。それはトマトのサイレンシングは通常Nに比べて非効率であること、しかし、注意すべきであるbenthamiana。目的の遺伝子のRNA転写物の豊富さは、常に、ターゲット遺伝子を効率的にダウンレギュレートされていることを保証するために測定する必要があります。 N.からそれにもかかわらず、異種遺伝子配列benthamiana、トマト、その逆も⁸で、それぞれのオルソログを黙らせるために使用することができます。

Protocol

パート1：植物材料サイレンシングのために使用されるN. benthamiana植物は2前後となるはず½子葉や最初の2時間である週は古い- 4本葉が浮上している。 8日間の後出現、真の葉はまだ登場していない-トマト（ トマト ）の植物は、7を使用されています。 パート2：VIGS 1日目各実験、pTRV1をかくまってアグロバクテ?…

Discussion

ウイルス誘発性遺伝子サイレンシングは、急速な逆遺伝学的スクリーンを可能にする方法です。それは、T – DNAまたはシロイヌナズナとトウモロコシのような特定の植物にのみ利用可能なトランスポゾン媒介遺伝子ノックアウトアウト、の生成が回避される。また、植物形質転換の時間のかかるプロセスを回避し、彼らが¹⁰またはその別のホストの標的配列を十分な相同性を持?…