Neokorteks mikrodevreler ağ dinamiklerini anlamak için, aynı anda çok sayıda nöron aktivitesini kaydetmek için esastır. In vivo iki foton kalsiyum görüntüleme, bir tek hücre çözünürlük ile yoğun bir nöronal nüfusun faaliyet kaydetmenize olanak sağlayan tek yöntem.
Abstract
Neokorteks mikrodevreler ağ dinamiklerini anlamak için, aynı anda çok sayıda nöron aktivitesini kaydetmek için esastır. In vivo iki foton kalsiyum görüntüleme, bir tek hücre çözünürlük ile yoğun bir nöronal nüfusun faaliyet kaydetmenize olanak sağlayan tek yöntem. Bu yöntem, çok sayıda nöron tarafından alınan ve son olarak in vivo iki foton mikroskop kullanarak zaman atlamalı kalsiyum görüntüleme ile nöron aktivitesini kayıt olabilir floresan kalsiyum göstergesi boya enjekte kraniyal görüntüleme penceresi implante oluşur. Astrosit özel boyalar ko-enjeksiyon astrositler gelen nöronların ayırt etmek sağlar. Bu teknik, farelerde farklı hücre grupları ağ etkileşimi daha iyi anlamak için, nöron spesifik alt popülasyonlar floresan moleküller ifade yapılabilir.
Protocol
Floresan kalsiyum indikatör çözeltisi hazırlayın. Biz kısa boyalar acetoxymethyl ester boyaların kullanımı, veya AM. Bunlar ekstraselüler enjekte edilen hücreler tarafından alınabilir boyalar. Biz genellikle 1 mM konsantrasyonda Oregon-Yeşil BAPTA 01:00 AM Fluo-4 kullanın. AM boyalar 50 mikrogram flakonlarda Invitrogen elde edilebilir. Biz ilk DMSO F-127 Pluronic% 20'lik bir çözelti hazırlamak. Biz temizleyene kadar her gün kullanmak için önce çözüm sıcak. Biz kalsiyum göstergesi 10 mM konsantrasyon 15-20 …
Discussion
Bu yöntemin avantajı, elektrofizyolojik kayıtlar üzerinde daha az invaziv ve yoğun nöron nöron ağları faaliyet kayıtları izin vermesidir. Bu işlemi yaparken kraniotomi yaparken dura zarar vermemek için aşırı dikkat çekmek için hatırlamak önemlidir. Subdural kanama bile küçük bir miktar büyük ölçüde görüntüleme belirsiz.
Acknowledgements
Biz kalsiyum göstergelerin toplu yükleme optimize yararlı tartışmalar için Olga Garaschuk kabul etmek istiyorum.