Для того чтобы понять динамику сети микросхем в коре головного мозга, очень важно одновременно записывать активность большого числа нейронов. В естественных условиях двухфотонного кальция изображений является единственным методом, который позволяет регистрировать активность нейронов плотной населения с одноклеточных разрешения.
Abstract
Для того чтобы понять динамику сети микросхем в коре головного мозга, очень важно одновременно записывать активность большого числа нейронов. В естественных условиях двухфотонного кальция изображений является единственным методом, который позволяет регистрировать активность нейронов плотной населения с одноклеточных разрешения. Метод заключается в имплантации черепных окна изображения, потребители инъекционных флуоресцентного красителя показатель кальция, что может быть подхвачена большим количеством нейронов и, наконец, запись активности нейронов во времени изображений кальция промежуток использования в естественных условиях двухфотонного микроскопа. Сотрудничество инъекции астроцитов конкретных красителями позволяет дифференцировать нейронов из астроцитов. Техника может быть выполнена в мышей, экспрессирующих флуоресцентных молекул в конкретных субпопуляции нейронов, чтобы лучше понять сетевые взаимодействия различных групп клеток.
Protocol
Подготовка решения флуоресцентных индикаторов кальция. Мы используем ацетоксиметил красителей эфир, или АМ красители для краткости. Эти красители, которые могут быть рассмотрены клетки при введении внеклеточно. Обычно мы используем Орегон-зеленый BAPTA-1 АМ или Fluo-4 утра в концентрации 1 мМ. AM кра?…
Discussion
Преимущество этого метода по сравнению с электрофизиологических записей является то, что она менее инвазивных и позволяет записях деятельности в плотных нейронов нейронной сети. При выполнении этой процедуры важно помнить, принять крайнюю осторожность при выполнении трепанации черепа, чтобы н?…
Acknowledgements
Мы хотели бы выразить признательность Ольга Garaschuk за полезные обсуждения по оптимизации массовой загрузки кальция показателей.