Этот протокол описывает метод облегчения сбора образцов из образцов радикальной простатэктомии. Цель состоит в том, чтобы картировать, охарактеризовать и препарировать образцы тканей на основе анатомопатологических критериев на основе анатомопатологических критериев перед их хранением в биобанке.
Получение свежих и хорошо охарактеризованных образцов опухолевой ткани имеет решающее значение для проведения высококачественных «омиксных» исследований. Тем не менее, это может быть особенно сложно в контексте рака предстательной железы (РПЖ) из-за уникальной природы этого органа и высокой гетерогенности, связанной с этой опухолью. С другой стороны, гистопатологическая характеристика образцов перед их хранением, не вызывающая существенных изменений в тканях, также представляет собой интригующую задачу. В этом контексте мы представляем новый метод получения, картирования, характеристики и микродиссекции резецированной ткани предстательной железы на основе анатомопатологических критериев.
В отличие от ранее опубликованных протоколов, этот метод сокращает время, необходимое для гистопатологического анализа образца предстательной железы без нарушения его структуры, что имеет решающее значение для оценки хирургических краев. Кроме того, он позволяет проводить разграничение и микромакродисперсию свежих образцов ткани предстательной железы, уделяя особое внимание гистологическим областям опухолей, определяемым патологическими критериями, такими как шкала Глисона, предшествующие поражения (интраэпителиальная неоплазия предстательной железы высокой степени злокачественности – PIN) и воспалительные поражения (простатит). Затем эти образцы хранятся в биобанке для последующих исследовательских анализов.
Рак предстательной железы (РПЖ) является2-м по частоте онкологическим заболеванием у мужчин и5-м по значимости причиной смерти во всем мире1. Лечение пациента и прогноз зависят от стадии и классификации опухоли (по шкале Глисона), о чем свидетельствует более высокая 5-летняя выживаемость локализованных и низкодифференцированных опухолей (6-я степень по шкале Глисона) (99%) по сравнению с высокими степенями по шкале Глисона и метастатическими опухолями (31%)2.
Локальный рецидив РПЖ и неудача лечения были связаны с характерной высокой генетической внутриопухолевой гетерогенностью этой опухоли3-го типа. Кроме того, РПЖ считается мультифокальным заболеванием с несколькими опухолевыми очагами, проявляющими различные морфологические, гистологические и молекулярные характеристики4, которые могут возникать независимо или происходить от общего предка опухолевых клеток5. Предыдущие исследования показали, что эволюция опухоли различается у пациентов в зависимости от конкретных генетических факторов, которые могут способствовать метастазированию или ограничивать клеточную линиюпростатой. Таким образом, молекулярная характеристика различных опухолевых очагов имеет решающее значение не только для постановки более точного диагноза и прогноза, но и для подбора эффективного и персонализированного лечения для пациента.
В этом контексте биомедицинские исследования и интегративные мультиомические подходы открывают беспрецедентные возможности для классификации рака по различным подтипам, идентификации диагностических и прогностических биомаркеров, а также обнаружения маркеров, связанных с ответом на лечение. Кроме того, эти подходы способствуют лучшему пониманию биологии этого заболевания 6,7. Биологические образцы, будь то ткани или биожидкости, могут быть проанализированы с использованием различных мультиомиксных платформ (геномика, транскриптомика, протеомика, метаболомика и т.д.) для выявления биологических особенностей, лежащих в основе патофизиологии рака, тем самым устраняя существующие ограничения, связанные с генетической и фенотипической гетерогенностью. Тем не менее, важно учитывать, что качество данных, полученных в результате омиксных исследований, зависит от качества образцов, собранных из опухолей, их точной характеристики, а также последующей обработкии хранения.
В этом контексте получение свежей ткани РПЖ для исследования представляет собой методологическую проблему из-за сложности успешного отбора проб опухоли9. Предыдущие методы включали случайную выборку после радикальной простатэктомии, что давало плохие результаты10. Тем не менее, более поздние подходы включают таргетные протоколы, основанные как на магнитно-резонансной томографии (МРТ), так и на данных биопсии, что приводит к повышению эффективности при сборе образцов опухолей11.
С другой стороны, гистопатологическая характеристика образцов до их хранения без существенного изменения тканей также представляет собой интересную задачу. Следовательно, во многих случаях гистопатологическое определение образцов проводят после их анализа (например, метаболомный анализ HR 1H NMR)12. Такая практика влечет за собой излишние расходы, временные затраты и потерю значительного количества образцов, которые в итоге исключаются из анализа (например, образцов, которые после гистопатологического анализа оказываются не образцами опухоли). В других случаях гистопатологическая характеристика образцов проводится до их анализа. Фактически, в некоторых предыдущих исследованиях была предпринята попытка стандартизировать методы для получения репрезентативных высококачественных исследовательских образцов из образцов радикальной простатэктомии для геномики и метаболомики13,14. Тем не менее, эффективность отбора проб значительно выше при заборе из уже гистологически подтвержденных срезов (88%), которые разрушают ткань, по сравнению с неподтвержденными срезами (45%)1.
В данной работе представлена новая методология для преодоления этих ограничений, направленная на получение свежих и хорошо охарактеризованных образцов ПК перед хранением в биобанке. Этот метод был разработан в результате совместных усилий различных клинических служб (урологии, патологии и биобанка больницы La Fe). Важно подчеркнуть, что биобанки играют важную роль в сборе, обработке, сохранении и хранении биологических образцов, обеспечивая при этом высокое качество образцов и данных, а также соблюдение этических и законодательных требований 8,15,16.
В любом научном исследовании получение качественных образцов является важным требованием для уменьшения систематических погрешностей и получения надежных результатов22. Таким образом, контроль преаналитических переменных, таких как температура, при которой образцы обр?…
The authors have nothing to disclose.
А.Л. подтверждает контракт на постдокторскую диссертацию «Маргарита Салас» (номер 21-076), а контракт на проведение исследований с MAM-T «Мария Замбрано» (номер МАЗ/2021/03 UP2021-021). Оба контракта были профинансированы Европейским союзом и ЕС следующего поколения.
Cadiere forceps | Intuitive | PN1052082-US 10/2021 | Part number: 471049. 18 uses. |
Conventional slides | Knittel Glass | 2021 | Ground/ Frosted end |
Cryostat microtome | Thermo Fisher Scientific | — | Criostato CryoStar NX50 |
Cryotubes | Greiner Bio-One GmbH | Ref.: 122280. | CRYO S. PP, with screw cap, sterile. |
Da Vinci surgical system | Intuitive | PN1052082-US 10/2021 | XI model |
Dissection instruments | Bayer | — | Two tweezers and a surgical blade |
DPX Eukitt | Medizin- und Labortechnik GmbH | 6.00.01.0001.06.01.01 | |
Eosin | Agilent | 157252 | |
Fenestrated bipolar forceps | Intuitive | PN1052082-US 10/2021 | Part number: 471205. 14 lives. |
Force bipolar | Intuitive | PN1052082-US 10/2021 | Part number: 471405. 12 uses. |
Freezers | Thermo Scientific | MODEL 907. -80 ºC | |
Hematoxylin | Agilent | 157251 | |
Inmunohistochemistry Slides | Agilent-Dako | K802021-2 | |
Large needle driver | Intuitive | PN1052082-US 10/2021 | Part number: 471006. 15 uses. |
Maryland bipolar forceps | Intuitive | PN1052082-US 10/2021 | Part number: 471172. 14 uses. |
Microscope | Olympus | — | Olympus cx40 |
Microtome blades | PFM Medical | a35 | |
Monopolar curved scissors | Intuitive | PN1052082-US 10/2021 | Part number: 470179. 10 uses. |
OCT compound | NEG-50 | LOT.117340 | |
PlusSpeed S Single-use Biopsy Device with beveled tip | Peter Pflugbeil GmbH | PSS-1825-S | |
ProGasp forceps | Intuitive | PN1052082-US 10/2021 | Part number: 471093. 18 uses. |
Sample holder Disc | Davidson Cryo Chuck. BradleyProducts | 30 mm | |
Tissue ink | Pelikan | 2021 | Ink 4001 brilliant black (301168) |
Xylol | Quimipur | Ref. 169 |