말초 혈액 한 방울에서 파생 된 T 세포에 바인딩된 PD-1 차단 항체 모니터링
Summary
우리는 암 환자에게서 말초 혈액의 단지 한 방울을 요구하는 T 세포에 PD-1-차단 항체의 결합을 평가하기 위한 간단한 유동 세포 분석분석서를 개발했습니다.
Abstract
PD-1-차단 항체를 포함한 면역 체크포인트 억제제는 다양한 유형의 암에서 치료 결과를 크게 개선했습니다. 이 면역 요법의 약리학적 인 효능은 오래 지속되며 지속적인 혈중 농도로 인해 주사 중단을 넘어서도 연장됩니다. 여기서 우리는 PD-1-차단 항체 니볼루맙 및 펨브롤리주맙의 T 세포 결합 상태를 평가하기 위한 간단한 유동 세포 분석기를 개발했다. 포도당 검사같이, 이 분석실험은 말초 혈액의 단지 1 방울을 요구합니다. T 세포에 결합하는 항체를 시각화하는 것은 항체 혈중 농도를 측정하는 것보다 더 신뢰할 수 있습니다. 추가적으로, 필요한 경우에, 우리는 잠재적으로 PD-1-차단 항체에 묶인 T 세포에 많은 특유한 면역 관련 마커를 분석할 수 있습니다. 따라서, 이것은 암 환자에서 PD-1-차단 항체의 약리효과를 분석하기 위한 간단하고 최소침습적인 전략이다.
Introduction
PD-1-차단 항체는 비소세포 폐암(NSCLC)1,2,3,4를포함하는 다양한 유형의 암치료를 위한 표준 선택이 되고 있다. 그(것)들은 전통적인 세포 독성 화학요법에 반응하지 않은 암 환자의 부분 집합에 있는 현저한 치료 효력을 보여줍니다. 그러나, PD-1-차단 항체를 포함하는 면역 체크포인트 억제제(ICIs)는, 면역 관련 부작용(irAEs)이라고 불리는 특이적 스펙트럼의 독특하고 뚜렷한 스펙트럼을 유발할 수있다 5. irAEs는 거의 모든 조직에 영향을 미칠 수 있지만, 그들은 가장 일반적으로 위장관에서 관찰, 내분비 땀샘, 피부, 간, 그들은 소양증을 일으킬 수 있습니다, 발진, 구역질, 설사, 및 갑상선 질환6,7. 일반적으로 대부분의 iAEs는 ICI가 발생한 후 1~2개월 이내에 나타납니다. 그러나, 어떤 경우에는, 그(것)들은 처리의 시작 후에 1 년 이상 또는 처리중단후에6,7후에 생길 수 있습니다 . 그(것)들은 또한 그밖 병리에서 구별하기 어려울 지도 모르다 각종 현상을 일으키는 원인이 됩니다. 따라서 iAE를 신속하게 진단하고 적절하게 치료하는 것이 어려울 수 있습니다. irAEs는 모든 조직에 영향을 미칠 수 있고, 그들의 개시는 강하게 PD-1-차단 항체에 묶인 면역 세포, 특히 T 세포를 순환에 의해 영향을 받습니다. 따라서 항체 표적 T 세포를 모니터링하는 간단하고 최소 침습적인 방법은 임상 설정에서 중요하다.
여기에서, 우리는 니볼루맙 또는 펨브롤리주맙을 수신한 암 환자에게서 말초 전혈의 한 방울을 사용하여 T 세포에 PD-1-차단 항체의 결합을 평가하는 간단한 방법을 개발했습니다. 이러한 접근법을 사용하여, 우리는 1) T 세포에 결합하는 항체의 지속 시간, 2) 치료 항체에 의한 T 세포 PD-1 분자의 점유, 3) T 세포의 활성화 상태 및 면역학적 특징을 각각 모니터링할 수 있었다. 이 방법은 이전에 보고된 기술8의수정입니다. 필요한 혈액의 양은 포도당 검사에 필요한 것과 거의 동일하며, 접근법은 단핵 세포 농축 또는 PD-1-차단 항체와의 공동 배양을 필요로 하지 않는다. 우리는 이 방법이 또한 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 및 흉막 삼출액, 심낭 삼출액, 기관지 정맥 세척액 및 뇌척수액에서 세포를 포함하여 동결 된 샘플을 사용하여 수행 될 수 있음을 확인, 이 전략은 다센터 연구의 맥락에서 유용 할 수 있음을 시사. 이 방법은 iAEs의 조기 진단을 용이하게 할 수 있고, 또한 그들의 증상을 통제하고 PD-1 억제제 후에 후속 치료를 개시하기 위한 최적의 시간을 식별하는 적절한 면역 억제 치료를 결정하는 데 도움이 될 수 있다.
Protocol
Representative Results
Discussion
이 기사에서는, 우리는 우리가 원래 nivolumab 검출을 위해 개발한 말초 혈액의 한 방울에서 파생된 T 세포에 결합된 PD-1-차단 항체를 검출하기 위하여 유세포계를 이용한 방법을 보고합니다10. 이 기술은 매우 간단하고 수행하기 쉽지만 정확한 결과를 얻으려면 두 가지 중요한 사항을 주목해야합니다. 하나는 PD-1 분자를 검출하기 위해 니볼루맙 및 펨브롤리주맙과 경쟁하는 적절한 …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 일본과학진흥회(JP17K16045)와 일본의학연구개발원(JP18cm0106335, 19cm0106310)의 보조금을 지원받았습니다.
Materials
| 10X RBC Lysis Buffer (Multi-species) | Thermo Fisher Scientific | 00-4300-54 | 50 mL |
| APC/Cyanine7 anti-human CD4 Antibody | BioLegend | 300518 | Clone RPA-T4 |
| BD FACS Canto II Flow Cytometer | BD | ||
| Brilliant Violet 510 anti-human CD8a Antibody | BioLegend | 301048 | Clone RPA-T8 |
| Dulbecco's Phosphate Buffered Saline | nacalai tesque | 14249-95 | 500 mL |
| Falcon Round-Bottom Polystyrene Tubes | STEMCELL Technologies | 352058 | 5 mL |
| FcR Blocking Reagent, human | Miltenyi Biotec | 130-059-901 | 2 mL |
| FLOWJO | BD | ||
| Gibco Fetal Bovine Serum | Thermo Fisher Scientific | 12676029 | 500 mL |
| Mouse IgG1 monoclonal – Isotype control | abcam | ab81200 | |
| Mouse monoclonal Anti-Human IgG4 Fc | abcam | ab99825 | Clone HP6025 |
| Pacific Blue Mouse Anti-Human CD3 | BD | 558117 | Clone UCHT1 |
| PE-Cy7 Mouse anti-Human CD279 (PD-1) | BD | 561272 | Clone EH12.1 |
| PE-Cy7 Mouse IgG1 κ Isotype Control | BD | 557646 |
References
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