我们开发了一个简单的流式细胞测定法,用于评估PD-1阻滞抗体与T细胞的结合,只需要癌症患者的一滴外周血。
免疫检查点抑制剂,包括PD-1-阻断抗体,显著改善了各类癌症的治疗效果。这些免疫疗法的药理疗效是长期的,甚至延伸到停止注射,由于持续的血液浓度。在这里,我们开发了一个简单的流式细胞测定法,以评估PD-1-阻断抗体nivolumab和pembrolizumab的T细胞结合状态。与葡萄糖测试一样,这种检测只需要一滴外周血。可视化抗体结合T细胞比测量抗体血液浓度更可靠。此外,如有必要,我们可以分析与PD-1-阻断抗体结合的T细胞上的许多独特的免疫相关标记。因此,这是一种简单和微创的策略,用于分析PD-1-阻断抗体在癌症患者中的药理作用。
PD-1+阻断抗体已成为治疗各种癌症的标准选择,包括非小细胞肺癌(NSCLC)1、2、3、4。在一部分没有对常规细胞毒性化疗有反应的癌症患者中,它们显示出显著的治疗效果。然而,免疫检查点抑制剂(ICI),包括PD-1-阻断抗体,可以引起独特和不同的不良事件,称为免疫相关不良事件(irAEs)5。虽然irAEs可以影响几乎所有的组织,它们最常观察到在胃肠道,内分泌腺,皮肤和肝脏,他们可能导致瘙痒,皮疹,恶心,腹泻和甲状腺疾病6,7。一般来说,大多数 IrAEs 在 ICIs 启动后的 1 到 2 个月内出现。然而,在某些情况下,它们可能发生在开始治疗后1年,甚至在治疗停止6,7之后。它们也会导致各种症状,可能难以区别于其他疾病。因此,要及时诊断irAEs并对其进行适当治疗可能具有挑战性。irAE 可以影响所有组织,其发病受到循环免疫细胞的强烈影响,尤其是与 PD-1 和阻断抗体结合的 T 细胞。因此,在临床环境中,一种简单和微创的方法来监测抗体靶向T细胞非常重要。
在这里,我们开发了一个简单的方法,用接受尼沃卢巴或皮布吕祖马的癌症患者的一滴外周全血来评估PD-1-阻断抗体与T细胞的结合。使用这种方法,我们能够监测以下各项:1)抗体与T细胞结合的持续时间,2)治疗抗体占用T细胞PD-1分子,3)T细胞的活化状态和免疫特征。此方法是对以前报告的技术8的修改。所需的血液量与葡萄糖测试所需的血液量几乎相同,该方法不需要单核细胞富集或与PD-1-阻断抗体共同培养。我们确认这种方法也可以使用冷冻样品进行,包括外周血单核细胞(PBMC)和来自胸腔输液、心包液、支气管输液和脑脊液的细胞,这表明这种策略在多中心研究的背景下可能有用。这种方法可能有助于irAE的早期诊断,也有助于确定适当的免疫抑制治疗,以控制其症状,并确定在PD-1抑制剂后启动后续治疗的最佳时间。
在本文中,我们报道了一种使用流动细胞计检测PD-1-阻断抗体的方法,抗体与从一滴外周血衍生的T细胞结合,我们最初开发用于nivolumab检测10。虽然此技术非常简单且易于执行,但为了获得准确的结果,应注意两个要点。其一是检测PD-1分子,应使用与尼沃卢马布和皮布吕祖马布竞争的适当抗体。这个问题在先前的研究11中进行了评估。另一种是,在表面染色之?…
The authors have nothing to disclose.
这项工作得到了日本科学促进协会(JP17K16045)和日本医学研究发展厅(JP18cm0106335和19cm0106310)对S.K.的资助。
10X RBC Lysis Buffer (Multi-species) | Thermo Fisher Scientific | 00-4300-54 | 50 mL |
APC/Cyanine7 anti-human CD4 Antibody | BioLegend | 300518 | Clone RPA-T4 |
BD FACS Canto II Flow Cytometer | BD | ||
Brilliant Violet 510 anti-human CD8a Antibody | BioLegend | 301048 | Clone RPA-T8 |
Dulbecco's Phosphate Buffered Saline | nacalai tesque | 14249-95 | 500 mL |
Falcon Round-Bottom Polystyrene Tubes | STEMCELL Technologies | 352058 | 5 mL |
FcR Blocking Reagent, human | Miltenyi Biotec | 130-059-901 | 2 mL |
FLOWJO | BD | ||
Gibco Fetal Bovine Serum | Thermo Fisher Scientific | 12676029 | 500 mL |
Mouse IgG1 monoclonal – Isotype control | abcam | ab81200 | |
Mouse monoclonal Anti-Human IgG4 Fc | abcam | ab99825 | Clone HP6025 |
Pacific Blue Mouse Anti-Human CD3 | BD | 558117 | Clone UCHT1 |
PE-Cy7 Mouse anti-Human CD279 (PD-1) | BD | 561272 | Clone EH12.1 |
PE-Cy7 Mouse IgG1 κ Isotype Control | BD | 557646 |