כאן, אנו מציגים פרוטוקול לבצע את הבידוד והתרחבות של דם היקפי מונאוטרי תאים-cytokine נגזר המושרה CD3+CD56+ הרוצח תאים ולהמחיש ההשפעה שלהם באמצעות הרעלה נגד המטולוגית ותאים סרטניים מוצק באמצעות האבחון מחוץ לגוף האבחנה cy, לנסות מערכת.
חיסוני הסלולר המאמצת מתמקד בשחזור הכרה בסרטן באמצעות מערכת החיסון ומשפר את הריגת תאים סרטניים יעיל. Cytokine המושרה הרוצח (ק) טיפול תא T דווח להפעיל אפקטים ציטוטוקסיים משמעותיים נגד תאים סרטניים כדי להפחית את ההשפעות השליליות של ניתוח, קרינה, כימותרפיה בטיפול בסרטן. ק. ק. יכול להיות מופק מתאי דם היקפיים (PBMCs), מח עצם ו דם טבורי. תאים מסוג ק הם אוכלוסיית משנה הטרוגנית של תאי T עם CD3+CD56+ ו הרוצח הטבעי (NK) מאפייני פנוסטימית הכוללים מורכבות היסטליתתאימות העיקריים (mhc)-פעילות אנטי סרטניים בלתי מוגבלת. מחקר זה מתאר מוסמך, קליני ישימה, זרימה cy, המבוסס על השיטה המבוססת על כימות של היכולת cytolytic של תאים הנגזרות PBMC-נגזר נגד תאים סרטניים מוצק המטולוגי. בתוך האינטגרל cytolytic, התאים של ק. ק. ו. שכונתיות ביחס שונה עם תאים סרטניים היעד מוכתם. לאחר תקופת הדגירה, מספר תאי היעד נקבעים על ידי כתם חומצות הגרעין מחייב לזהות תאים מתים. שיטה זו ישימה הן עבור יישומים מחקריים והן עבור יישומי אבחון. תאים ק בעלי רעילות חזקה שניתן לחקור כאסטרטגיה חלופית לטיפול בסרטן על הערכה טרום קליני שלה על ידי התקנה cytometer מעקב (CS & T) מבוסס זרימה cy, מערכת המערכת.
לימפוציטים T ציטוטוקסיים הם מסוימים החיסון החיסונית האוכלוסייה המדיטים תגובות החיסון נגד סרטן. מספר אוכלוסיות של תאים מסוימים, כולל lymphokine המופעל הרוצח (לק) תאים, הגידול החדירה לימפוציטים (TILs), הרוצח הטבעי (NK) תאים, γδ T תאים, ו cytokine המושרה הרוצח (ק) תאים פותחו עבור טיפול תא T המאמצת (ACT) מטרות1. יש עניין הולך וגדל בתאי ק. ק., כי הם מייצגים תערובת של אוכלוסיות המושרה ציטוטוקסיים הנגרמת מפני הרחבה מתוך דם היקפי בתאי מונטובית (PMBCs)2.
הצמיחה בלתי מבוקרת של תאים מחולל הלימפה, מיאלואידית, ו lymphoblasts מוביל שלושה סוגים עיקריים של סרטן הדם (כלומר, לוקמיה, לימפומה, מיאלומה), גידולים מוצקים, כולל קרצינומות (למשל, סרטן ריאות, סרטן קיבה, סרטן צוואר הרחם), ו סרקומות, בין סרטן אחרים3. תאים ק הם תערובת של אוכלוסיות תאים המוצגים מגוון רחב של מורכבות היסטולוגית העיקריים (mhc)-פעילות אנטי סרטניים בלתי מוגבל ובכך להחזיק הבטחה לטיפול בגידולים המטולוגיים ומתקדמים4,5,6,7. תאי ק מהווים שילוב של תאים, כולל תאי T (CD3+CD56-), בתאי Nk-T (CD3+CD56+),ותאי nk (CD3–CD56+). אופטימיזציה של פרוטוקול האינדוקציה ק ‘ ק על ידי שימוש בלוח זמנים קבוע עבור התוספת של IFN-γ, anti-CD3 נוגדן, ו-IL-2, תוצאות ההרחבה של התאים קח 8. היכולת ציטוטוקסיני של תאים ק נגד תאים סרטניים בעיקר תלוי באירוסים של הקבוצה NK 2 חבר D (חבר של C-type-סוג לקטין משפחה הקולטן) NKG2D ligands על תאי הגידול, ועל ניקובים בתיווך מסלולים9. התוצאות של מחקר טרום קלינית גילה כי תאים ממריצים IL-15-מגורה המושרה הרעלת ציטופוטנטיות חזקות נגד קווי לוקמיה מיאלואידית חמורה וחריפה בתוך מבחנה והציגה alloreactivity נמוכה נגד PBMCs נורמלי ופיברופיצוצים9. לאחרונה, את התוצאה של התורם בריא חד פעמי הנגזר ק ג (1 x 108/ק”ג CD3+ תאים) אינפוזיה כמו איחוד בעקבות השתלת אלוגנאלומית nonmyeloablative לטיפול מיאלואידית הנאלדיליגיאמים במחקר קליני שלב II פורסמה10.
במחקר הנוכחי, פיתחנו הנוסחה האופטימיזציה של תרבות התא מורכב IFN-γ, IL-1α, anti-CD3 נוגדן, ו-IL-2 התווסף למדיום התא המטפיאה כדי להגדיל את הייצור של ק. ק., וחקר את ההשפעה ציטוטוקסיני של תאים ק נגד כרונית אנושית לוקמיה מיאלואידית (K562) תאים וסרטן השחלות (OC-3) תאים.
השיטה המתוארת היא פרוטוקול מהיר, נוח ואמין עבור בידוד והתרחבות של הרוצח ציטוקין cy, הנגרמת המושרה (ק) תאים מדגימות דם שלמות של תורמים בריאים. זה גם מראה את ההשפעה ציטוטוקסיק נגד לוקמיה (K562) ו סרטן השחלות תאים (OC-3) באמצעות זרימה cy, התקנה ומעקב אחר (CS & T) מערכת. תאים ק יכול להיות המושרה והרחיב בשיט?…
The authors have nothing to disclose.
מחקר זה היה נתמך על ידי סין רפואי החולים באוניברסיטת (DMR-תא-1809).
7-Amino Actinomycin D | BD | 559925 | ||
APC Mouse Anti-Human CD56 antibody | BD | 555518 | B159 | |
APC Mouse IgG1, κ Isotype Control | BD | 555751 | MOPC-21 | |
BD FACSCanto II Flow Cytometer | BD | 338962 | SN: R33896202856 | |
Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE) | BD | 565082 | Reconstritution of CFSE dye (500 mg) with 90 mL of DMSO | |
D-(+)-Glucose solution | SIGMA | G8644 | For K562 cell culture. Add 12.5 mL to 500 mL of complete medium | |
Dulbecco's Modified Eagle Medium/F12 | HyClone | SH30023.02 | Basal medium for OC-3 cell culture | |
Fetal bovine serum | HyClone | SH30084.03 | For K562 and OC-3 cell culture. Complete medium contains 10% of FBS | |
Ficoll-Paque Plus | GE Healthcare Life Sciences | 71101700-EK | Density gradient solution | |
FITC Mouse Anti-Human CD3 antibody | BD | 555332 | UCHT1 | |
FITC Mouse IgG1, κ Isotype Control | BD | 555748 | MOPC-21 | |
Human anti-CD3 mAb | TaKaRa | T210 | OKT3 | Add 2.5 mL of stock (1 mg/1 mL) to 50 mL of Induction medium. Storage stock at -80 °C |
Penicillin-Streptomycin | Gibco | 15140122 | Add 5 mL of stock (10,000 U/mL) to 500 mL of complete medium. Storage stock at 4 °C. | |
Proleukin | NOVARTIS | Reconstitution of Proleukin Powder (22×106 IU) with 1.2 mL of sterile water and add 2.7 mL to 50 mL of Induction medium. Storage stock at -20 °C | ||
Recombinant Human Interferon-gamma | CellGenix | 1425-050 | Reconstitution of rh IFN-g (5×105 IU/50 µg) with 200 µL of sterile water and add 20 mL to 50 mL of Induction medium. Storage stock at -20 °C | |
Recombinant Human Interleukin-1 alpha | PEPROTECH | 200-01A | Reconstitution rh IL-1α (10 µg) with 1 mL of sterile water and add 5 mL to 50 mL of Induction medium. Storage stock at -20 °C | |
RPMI1640 medium | Gibco | 11875-085 | Basal medium for K562 cell culture. Storage stock at 4 °C | |
Sigma 3-18K Centrifuge | Sigma | 10295 | ||
TrypLE Express Enzyme | Gibco | 12605028 | Cell dissociation enzyme; For deattachment of adheren cells. Storage at room temperature | |
X-VIVO 15 medium | Lonza | 04-418Q | Basal medium for PBMC and CIK cells. Storage at 4 °C |