Modelo de trasplante de aórtica cervical murino utilizando una técnica de manguito no sutura modificada
Summary
Aquí, presentamos un protocolo de trasplante aórtico heterotópico en ratones utilizando la técnica del manguito no sutura en un modelo de murina cervical. Este modelo se puede utilizar para estudiar la patología subyacente de la vasculopatía por aloinjerto crónico (CAV) y puede ayudar a evaluar nuevos agentes terapéuticos para prevenir su formación.
Abstract
Con la introducción de potentes protocolos inmunosupresores, se pueden realizar diferentes avances en la prevención y terapia de episodios de rechazo agudo. Sin embargo, sólo se pudo observar una mejora menor en los resultados a largo plazo de los órganos sólidos trasplantados en las últimas décadas. En este contexto, la vasculopatía por aloinjerto crónico (CAV) sigue representando la principal causa de insuficiencia orgánica tardía en el trasplante cardíaco, renal y pulmonar.
Hasta ahora, la patogénesis subyacente del desarrollo de CAV sigue sin estar clara, explicando por qué actualmente faltan estrategias de tratamiento eficaces y haciendo hincapié en la necesidad de modelos experimentales pertinentes para estudiar la fisiopatología subyacente que conduce a Formación de CAV. El siguiente protocolo describe un modelo de trasplante aórtico cervical heterotópico murino utilizando una técnica de manguito no sutura modificada. En esta técnica, un segmento de la aorta torácica se interposiciona en la arteria carótida común derecha. Con el uso de la técnica del manguito no sutura, se puede establecer un modelo fácil de aprender y reproducible, minimizando la posible heterogeneidad de las micro anastomosas vasculares suturadas.
Introduction
En las últimas seis décadas, el trasplante de órganos sólidos ha evolucionado de un procedimiento experimental a un estándar de atención para el tratamiento de la insuficiencia orgánica terminal1. Debido a la mejora de los agentes antimicrobianos, las técnicas quirúrgicas y el avance en los regimientos inmunosupresores, la tasa de éxito temprana del trasplante de órganos sólidos ha aumentado significativamente en las últimas décadas2.
Sin embargo, las tasas de supervivencia del injerto a largo plazo no han mejorado significativamente de la misma manera3. El desarrollo de CAV es el principal factor que limita la supervivencia a largo plazo4,5,6. Esta patología se caracteriza por la formación de una capa neointimal concéntrica que consiste en células musculares lisas, lo que conduce al estrechamiento progresivo del vaso y a la malperfusión consecutiva del órgano sólido trasplantado. En los receptores de trasplante de corazón, las lesiones de CAV se pueden diagnosticar en hasta el 75% de los pacientes 3 años después del trasplante7.
La fisiopatología de CAV aún no se entiende completamente. Parece estar relacionado con numerosos factores inmunológicos y no inmunológicos, lo que conduce a daños endoteliales con posterior activación endotelial y disfunción8. Hasta ahora, no existe ninguna opción de tratamiento causal para la prevención de la CAV, haciendo hincapié en la necesidad de un modelo animal pequeño reproducible con el fin de estudiar la formación y la posible terapia de CAV.
Con el uso de modelos de trasplante aórtico murino, CAV como lesiones se puede ver 4 semanas después del trasplante. Esas lesiones consisten principalmente en células musculares lisas vasculares, por lo tanto, que se asemejan a la patología humana. Debido a una amplia variedad de ratones transgénicos y noqueadores, el uso de modelos de ratón en patologías asociadas al trasplante ofrece una oportunidad única para identificar nuevas opciones terapéuticas y comprender su desarrollo. Debido al pequeño diámetro de los vasos trasplantados sin embargo, el uso de modelos de ratón se asocia comúnmente con largas curvas de aprendizaje y una alta tasa de complicaciones inicial9. Con la introducción de la técnica del manguito no sutura, esta parte más desafiante de la operación se puede facilitar y el diámetro de la anastomosis se mantiene constante10,11.
Protocol
Representative Results
Discussion
La vasculopatía crónica de aloinjerto es la principal causa de pérdida tardía del injerto después del trasplante de órganos sólidos del corazón y probables aloinjertos renales y pulmonares8. Hasta el momento, no se podría desarrollar ningún régimen terapéutico causal para prevenir la formación de CAV.
La fisiopatología de CAV es multifactorial e implica aspectos inmunológicos y no inmunológicos16. El uso de modelos de roedores en …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ninguno.
Materials
| Balb-c Mice (H2-d) | Charles River | Strain# 028 | Donor animal |
| Bipolar cautery system | ERBE | ICC 50 / 20195-023 | Bipolar cautery |
| C57BL/6J (H-2b) | Charles River | Strain# 027 | Recipient animal |
| Halsey Needle Holders | FST | 12501-12 | Needle Holder |
| Halsted-Mosquito Forceps | AESCULAP | BH111R | Curved Clamp |
| Medical Polyimide Tubing | Nordson MEDICAL | 141-0031 | Cuff-Material |
| Micro Serrefines | FST | 18055-04 | Micro Vessel Clip |
| Micro-Adson Forceps (serrated) | FST | 11018-12 | Standard Forceps |
| Micro-Serrefine Clamp Applying Forceps | FST | 18057-14 | Clipapplicator |
| S&T Forceps – SuperGrip Tips (Angled 45°) | S&T | 00649-11 | Fine Forceps |
| S&T Vessel Dilating Forceps – Angled 10° (Tip diameter 0.2 mm) | S&T | 00125-11 | Vesseldilatator |
| Schott VisiLED Set | Schott | MC 1500 / S80-55 | Light |
| Stereoscopic microscope | ZEISS | SteREO Discovery.V8 | Microscope |
| Student Fine Scissors / Surgical Scissors – Sharp-Blunt | FST | 91460-11 / 14001-12 | Standard Sissors |
| Vannas-Tübingen Spring Scissors (curved, 8.5 cm) | FST | 15004-08 | Microsissors (curved) |
| Vannas-Tübingen Spring Scissors (straight, 8.5 cm) | FST | 15003-08 | Microsissors (straight) |
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