Qui, presentiamo un protocollo di trapianto aortico eterotopico nei topi utilizzando la tecnica del bracciale non-suture in un modello di murino cervicale. Questo modello può essere utilizzato per studiare la patologia sottostante della vasculopatia allotrapianto cronica (CAV) e può aiutare a valutare nuovi agenti terapeutici al fine di prevenirne la formazione.
Con l’introduzione di potenti protocolli immunosoppressivi, sono possibili progressi distinti nella prevenzione e nella terapia degli episodi di rigetto acuto. Tuttavia, negli ultimi decenni si è potuto osservare solo un lieve miglioramento dei risultati a lungo termine degli organi solidi trapiantati. In questo contesto, la vasculopatia cronica allotrapianto (CAV) rappresenta ancora la principale causa di insufficienza di organi tardiva nel trapianto cardiaco, renale e polmonare.
Finora, la patogenesi di fondo dello sviluppo di CAV rimane poco chiara, spiegando perché attualmente mancano strategie di trattamento efficaci e sottolineando la necessità di modelli sperimentali pertinenti al fine di studiare la fisiopatologia sottostante che porta a formazione di CAV. Il seguente protocollo descrive un modello di trapianto aortico cervicale eterotopico murno utilizzando una tecnica di polsino non sutura modificata. In questa tecnica, un segmento dell’aorta toracica è interposto nella giusta arteria carotide comune. Con l’uso della tecnica del bracciale non-sutura, è possibile stabilire un modello facile da imparare e riproducibile, riducendo al minimo la possibile eterogeneità delle microantomosi vascolari suturate.
Negli ultimi sei decenni, il trapianto di organi solidi si è evoluto da una procedura sperimentale a uno standard di cura per il trattamento del fallimento dell’organo allo stadio finale1. A causa del miglioramento degli agenti antimicrobici, delle tecniche chirurgiche e dell’avanzamento nei reggimenti immunosoppressivi, il tasso di successo precoce del trapianto di organi solidi è aumentato significativamente negli ultimi decenni2.
Tuttavia, i tassi di sopravvivenza all’innesto a lungo termine non sono migliorati in modo significativo nello stesso modo3. Lo sviluppo di CAV è il principale fattore che limita la sopravvivenza a lungo termine4,5,6. Questa patologia è caratterizzata dalla formazione di uno strato neointimale concentrico costituito da cellule muscolari lisce, che porta al progressivo restringimento del vaso e alla perffusione consecutiva dell’organo solido trapiantato. Nei pazienti trapiantati di cuore, le lesioni CAV possono essere diagnosticate in fino al 75% dei pazienti 3 anni dopo il trapianto7.
La fisiofisiologia del CAV non è ancora del tutto compresa. Sembra essere correlato a numerosi fattori immunologici e non immunologici, che portano a danni endoteliali con conseguente attivazione endoteliale e disfunzione8. Finora non esiste alcuna opzione di trattamento causale per la prevenzione del CAV, sottolineando la necessità di un modello animale piccolo riproducibile al fine di studiare la formazione e la potenziale terapia del CAV.
Con l’uso di modelli di trapianto aortico murino, CAV come lesioni può essere visto 4 settimane dopo il trapianto. Queste lesioni sono costituite principalmente da cellule muscolari lisce vascolari, in tal modo, simile alla patologia umana. A causa di un’ampia varietà di topi transgenici e abbattuti, l’uso di modelli murini nelle patologie associate al trapianto offre un’opportunità unica per identificare nuove opzioni terapeutiche e comprenderne lo sviluppo. A causa del piccolo diametro dei vasi trapiantati, tuttavia, l’uso di modelli murini è comunemente associato a lunghe curve di apprendimento e un alto tasso di complicanza iniziale9. Con l’introduzione della tecnica del bracciale non-sutura, questa parte più impegnativa dell’operazione può essere facilitata e il diametro dell’anastomosi è mantenuto costante10,11.
La vasculopatia allotrapianto cronica è la causa principale della perdita tardiva dell’innesto dopo il trapianto di organi solidi del cuore e probabilmente allotrapianti renali e polmonari8. Finora, non è stato possibile sviluppare alcun regime terapeutico causale al fine di prevenire la formazione di CAV.
La fisiofisiologia del CAV è multifattoriale e coinvolge gli aspetti immunologici e non immunologici16. L’uso di modelli di roditori nei tr…
The authors have nothing to disclose.
nessuno.
Balb-c Mice (H2-d) | Charles River | Strain# 028 | Donor animal |
Bipolar cautery system | ERBE | ICC 50 / 20195-023 | Bipolar cautery |
C57BL/6J (H-2b) | Charles River | Strain# 027 | Recipient animal |
Halsey Needle Holders | FST | 12501-12 | Needle Holder |
Halsted-Mosquito Forceps | AESCULAP | BH111R | Curved Clamp |
Medical Polyimide Tubing | Nordson MEDICAL | 141-0031 | Cuff-Material |
Micro Serrefines | FST | 18055-04 | Micro Vessel Clip |
Micro-Adson Forceps (serrated) | FST | 11018-12 | Standard Forceps |
Micro-Serrefine Clamp Applying Forceps | FST | 18057-14 | Clipapplicator |
S&T Forceps – SuperGrip Tips (Angled 45°) | S&T | 00649-11 | Fine Forceps |
S&T Vessel Dilating Forceps – Angled 10° (Tip diameter 0.2 mm) | S&T | 00125-11 | Vesseldilatator |
Schott VisiLED Set | Schott | MC 1500 / S80-55 | Light |
Stereoscopic microscope | ZEISS | SteREO Discovery.V8 | Microscope |
Student Fine Scissors / Surgical Scissors – Sharp-Blunt | FST | 91460-11 / 14001-12 | Standard Sissors |
Vannas-Tübingen Spring Scissors (curved, 8.5 cm) | FST | 15004-08 | Microsissors (curved) |
Vannas-Tübingen Spring Scissors (straight, 8.5 cm) | FST | 15003-08 | Microsissors (straight) |