コットンボールワームでデンソウイルスのホストフィットネス上のホスト組織分布、伝送モード、および効果を調査するためのプロトコル
Summary
ここでは、ホスト組織分布を調査するためのプロトコル、送信モード、および鱗翅目の種、綿のボールワーム内デンソウイルスのホストのフィットネスの効果を提示します。このプロトコルは、他の経口送信されるウイルスとそれらの昆虫ホスト間の相互作用を研究するために使用することができます。
Abstract
多くの小説のウイルスは、次世代シーケンシング技術を使用して動物宿主中で発見されました。以前、我々は鱗翅目の種で、mutualisticウイルス、 オオタバコガのデンソウイルス（HaDV2）を報告し、コットンボールワーム、 オオタバコガ （ヒューブナー）。ここでは、現在、そのホスト上のHaDV2の影響を研究するために使用されるプロトコルについて説明します。まず、我々は、単一の繁殖ペアからHaDV2フリーコットンボールワームコロニーを確立します。 1 HaDV2感染、その他の非感染：次に、我々は、経口的に同じ遺伝的背景を持つ2個のコロニーを生成するために濾過された液体をHaDV2含有していくつかの新生児の幼虫の子孫を接種します。ホスト組織分布およびHaDV2の伝送効率を決定するためのプロトコルであるようHaDV2感染と-uninfected個体間生命表パラメータ（ 例えば、幼虫、さなぎ、および成体期と産卵数）を比較するためのプロトコルもまた、提供されます。これらのプロトコルをめざしまた、その昆虫の宿主、特に鱗翅目のホスト上の他の経口感染ウイルスの影響を調査するために適しているULD。
Introduction
過去数十年では、そのような次世代シーケンシング（NGS）としてシーケンシング技術の開発は、多くの新規なDNAおよびRNAウイルス、特に非病原性ウイルスだけでなく、以前から知られているウイルス1、2、3の新規な分離株の発見を容易にしました4、5、6、7、8、9、10、11、12。モデル生物キイロショウジョウバエでは、20の以上の新たな部分ウイルスゲノムは、メタゲノム技術13を用いて検出されています。新規なウイルスを含む多くのウイルス配列は、また、ミツバチ、Mのような他の昆虫で同定されていますosquitoes、アジアの柑橘類psyllids、トンボ、および複数の鱗翅目種14、15、16、17、18、19、20、21。
今後は、より多くの新しいウイルスがこれらの高度な技術を使って昆虫で発見されることが期待できます。したがって、ウイルス-宿主相互作用の我々の理解はそれに応じて6、9変更されることがあります。例えば、ウイルス-宿主相互作用は、多くの新規ウイルスがmutualisticパートナーではなく、厳密な病原体22のように定義されているため、以前は、思ったよりも複雑であると考えられます。例えば、Dysaphis plantagineaの中mutualisticデンソウイルスDplDNVは翼のモーフを誘導しウイルスの23だけでなく、ホストの分散を促進する、モビリティを向上させます。また、mutualisticウイルスは、哺乳動物の健康、干ばつや植物の耐寒性、および細菌感染症24の影響に関して説明してきました。セネカバレーウイルス-001は、神経内分泌癌が25を特徴とする腫瘍細胞に対する選択的細胞毒性を媒介することが示されています。 A型肝炎ウイルス感染は、C型肝炎ウイルスの複製を抑制し、C型肝炎26からの回復につながる可能性があります。ヘルペスウイルスの潜伏は、細菌感染27から共生の保護を与えます。ヒト内在性レトロウイルスHERV-Wのエンベロープ糖タンパク質は、脾臓壊死ウイルス28に対する細胞耐性を誘導します。真菌エンドファイトからクルブラリア熱トレランスウイルス（CThTV）は、この菌と熱帯パニック草の間mutualisticの相互作用に関与していますREF "> 29。そこで、新たに見つかったウイルスとそのホスト間の相互作用についての知識は、その生物学と経営上の新鮮な視点を生成する必要があります。しかし、小説ウイルス、急性感染症の典型的な明らかな兆候を表示しない、特に秘密のウイルスは、めったにありません調査し、我々はそのホスト上で新たに発見されたウイルスの影響を調査するためにパイプラインとプロトコルを必要とされて。
以前、我々は、コットンボールワーム、 オオタバコガにおける有病率は新しいmonosenseデンソウイルスHelicoverpaオオタバコガデンソウイルス（HaDV2）を報告し、HaDV2とコットンボールワーム30、31間のmutualistic関係の証拠を提示しています。本稿では、詳細にHaDV2とそのコットンボールワームホストの間の相互作用を研究するために実験室のプロトコルを記述します。ここで紹介するプロトコルはまた、Rを調べる研究者に非常に関連している可能性があります特に鱗翅目害虫で、他の経口送信されるウイルスのOLE。
Protocol
Representative Results
Discussion
過去数十年では、昆虫ウイルスの相互作用に関するほとんどの研究は、ミツバチの健康34、35、36、ヒト疾患37のベクトルに焦点を当てている、植物は38ウイルス、および生物学的制御剤39として大きな可能性を持っているいくつかの昆虫病原性ウイルス。ほとんど注目は…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、中国の国家重点基礎研究プログラム（第2013CB127602）と中国の国立科学財団（番号31321004）のクリエイティブ研究グループのための科学基金によってサポートされていました。
Materials
| 24-well plate | Corning | 07-200-740 | Multiple suppliers available. |
| DNA extraction kit | TIANGEN | DP304-03 | Multiple suppliers available. |
| thermal cycler | Veriti; Applied Biosystems | 4375786 | |
| PBS | Corning | 21-040-CV | |
| 0.22 µm membrane filter | Millipore | SLGS025NB | |
| pEASY-T Cloning Vector | TransGen, Beijing, China | CT301-02 | |
| Tweezers | IDEAL-TEK | 2.SA | |
| Premix Ex Taq (Probe qPCR) | Takara | RR390A | |
| Probes | Invitrogen | Custom order | |
| Primers | Invitrogen | Custom order | |
| microspectrophotometry NanoDrop 2000c | Thermo scientific | not available | |
| 7500 Real-Time PCR system | Applied Biosystems | not available | |
| stereomicroscope SZX-16 | Olympus | not available | |
| sucrose | Multiple suppliers available. | ||
| vitamin complex | Multiple suppliers available. |
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