Protocoles pour étudier l'hôte d'un tissu de distribution, en mode de transmission, et l'effet sur la remise en forme de l'hôte d'un Densovirus dans le coton Heliothis
Summary
Nous présentons ici un protocole pour étudier la distribution hôte tissus, mode de transmission, et l'effet sur l'aptitude hôte d'un densovirus au sein d'une espèce lépidoptères, le ver de la capsule. Ce protocole peut être utilisé pour étudier l'interaction entre autres virus transmis oralement et leurs hôtes d'insectes.
Abstract
De nombreux nouveaux virus ont été découverts chez des hôtes animaux en utilisant des technologies de séquençage de nouvelle génération. Auparavant, nous avons signalé un virus mutualisme, Helicoverpa armigera densovirus (HaDV2), dans une espèce lépidoptères, le ver de la capsule, Helicoverpa armigera (Hubner). Ici, nous décrivons les protocoles qui sont actuellement utilisés pour étudier l'effet de HaDV2 sur son hôte. Tout d'abord, nous établissons un ver de la capsule sans HaDV2 colonie à partir d'une seule paire d'élevage. Ensuite, nous inocule par voie orale une progéniture avec des larves HaDV2-nouveau-né contenant du liquide filtré pour produire deux colonies avec le même fond génétique: une infection HaDV2, l'autre non infectées. Un protocole pour comparer les paramètres du tableau de vie (par exemple, des larves, des pupes et les périodes d'adulte et de la fécondité) entre les individus infectés par le HaDV2 et -uninfected est également présentée, ainsi que les protocoles de détermination de la distribution hôte tissu et l' efficacité de transmission de HaDV2. Ces protocoles woULD également adapté pour étudier les effets d'autres virus transmis oralement sur leurs hôtes d'insectes hôtes, en particulier lépidoptères.
Introduction
Au cours des dernières décennies, a facilité la découverte de nombreux virus d'ADN et d' ARN nouveaux, les virus en particulier non pathogènes, mais aussi des isolats nouveaux de virus connus précédemment 1, 2, 3 le développement de la technologie de séquençage telles que le séquençage de prochaine génération (NGS), 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12. Dans l'organisme modèle Drosophila melanogaster, plus de 20 nouveaux génomes viraux partiels ont été détectés en utilisant des techniques métagénomiques 13. De nombreuses séquences virales, y compris de nouveaux virus, ont également été identifiés dans d'autres insectes, comme les abeilles, mosquitoes, les psylles d'agrumes asiatiques, libellules, et plusieurs espèces de lépidoptères 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21.
À l'avenir, on peut penser que les virus plus de nouveaux seront découverts chez les insectes à l'aide de ces technologies de pointe; Par conséquent, notre compréhension de l'interaction virus-hôte peut changer en conséquence 6, 9. Par exemple, les interactions virus-hôte sont considérées comme plus compliquée qu'on ne le pensait, parce que beaucoup de nouveaux virus sont définis comme des partenaires plutôt que des agents pathogènes mutualisme stricts 22. Par exemple, le DplDNV mutualisme de densovirus dans Dysaphis plantaginea induit ailé Morph et augmente la mobilité, ce qui facilite la dispersion de l'hôte ainsi que le virus 23. De plus, les virus mutualisme ont été décrits en ce qui concerne la santé des mammifères, la sécheresse et la tolérance au froid des plantes, et l'impact des infections bactériennes 24. Vallée Seneca virus-001 est montré à la médiation cytotoxicité sélective vers les cellules tumorales avec le cancer neuroendocrine comporte 25. L' hépatite A infections virales répriment la réplication du virus de l' hépatite C et peut conduire à la récupération de l' hépatite C 26. Temps d' attente herpèsvirus confère une protection contre l' infection bactérienne symbiotique 27. La glycoprotéine d'enveloppe du rétrovirus endogène humain HERV-W induit une résistance cellulaire au virus de la nécrose de la rate 28. le virus de la tolérance thermique Curvularia (CThTV) à partir d'un champignon endophyte est impliqué dans l'interaction mutualisme entre ce champignon et une panic tropicaleref "> 29. Par conséquent, la connaissance des interactions entre les virus nouvellement trouvés et leurs hôtes devrait générer de nouvelles perspectives sur leur biologie et de gestion. Cependant, les nouveaux virus, en particulier les virus cachés présentant aucun signe typique d' une infection aiguë, ont rarement été étudié, et nous avons besoin d'un pipeline et des protocoles pour étudier les impacts des nouveaux virus trouvés sur leurs hôtes.
Auparavant, nous avons rapporté la prévalence d' une nouvelle monosense densovirus Helicoverpa armigera densovirus (HaDV2) dans le ver de la capsule, Helicoverpa armigera, et présenté la preuve d'une relation de mutualisme entre HaDV2 et la noctuelle 30 de coton, 31. Dans cet article, nous allons décrire le protocole de laboratoire pour étudier en détail l'interaction entre HaDV2 et son hôte ver de la capsule. Le protocole présenté ici peut également être très utile pour les chercheurs qui examinent la role d'autres virus transmis par voie orale, en particulier dans les lépidoptères nuisibles.
Protocol
Representative Results
Discussion
Au cours des dernières décennies, la plupart des études sur les interactions virus d' insectes ont mis l' accent sur la santé des abeilles 34, 35, 36, vecteurs de maladies humaines 37, virus des plantes 38, et certains virus pathogènes d' insectes qui ont un grand potentiel comme agents de lutte biologique 39. Peu d'attention a été ac…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par le Programme national de recherche sur la clé de base de la Chine (n ° 2013CB127602) et le Fonds des sciences pour les groupes de recherche Creative de la National Science Foundation de Chine (n ° 31321004).
Materials
| 24-well plate | Corning | 07-200-740 | Multiple suppliers available. |
| DNA extraction kit | TIANGEN | DP304-03 | Multiple suppliers available. |
| thermal cycler | Veriti; Applied Biosystems | 4375786 | |
| PBS | Corning | 21-040-CV | |
| 0.22 µm membrane filter | Millipore | SLGS025NB | |
| pEASY-T Cloning Vector | TransGen, Beijing, China | CT301-02 | |
| Tweezers | IDEAL-TEK | 2.SA | |
| Premix Ex Taq (Probe qPCR) | Takara | RR390A | |
| Probes | Invitrogen | Custom order | |
| Primers | Invitrogen | Custom order | |
| microspectrophotometry NanoDrop 2000c | Thermo scientific | not available | |
| 7500 Real-Time PCR system | Applied Biosystems | not available | |
| stereomicroscope SZX-16 | Olympus | not available | |
| sucrose | Multiple suppliers available. | ||
| vitamin complex | Multiple suppliers available. |
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