Summary

impennata<em> Ixodes scapularis,</em> Il Tick Black-legged: Alimentazione stadi immaturi sui topi

Published: May 08, 2017
doi:

Summary

La produzione di zecche allevate in laboratorio sano è essenziale per gli studi di biologia tick, tick e-patogeno interazioni. Qui mostriamo un semplice protocollo per l'alimentazione tick immaturo che è costo-efficace e meno stressante per i topi.

Abstract

Ixodes scapularis , il vettore della malattia di Lyme, è uno dei più importanti vettori delle malattie negli Stati Uniti orientali e mediorientali. Questa specie è un trifoglio host che richiede un pasto di sangue da un ospite vertebrato per ogni fase di sviluppo e le femmine adulte richiedono un pasto di sangue per la riproduzione. Le zecche di larve si attaccano al loro ospite per 3 – 5 giorni per l'alimentazione e scendono l'ospite quando sono completamente ingolfati. Questa dipendenza da diversi host differenti e il lungo periodo di attacco per l'ingranaggio complicano l'allestimento del ticchettio nell'ambiente di laboratorio. Tuttavia, per comprendere la biologia dei tick e le interazioni tra tick-pathogen, la produzione di zecche sane e testate da laboratorio è essenziale. Qui dimostriamo un semplice e conveniente protocollo per l'immatura del tick in mouse sui topi. Abbiamo modificato i protocolli esistenti per diminuire lo stress sui topi e aumentare il successo e la sopravvivenza di alimentazione dei ticchetti usando gabbie monouso senza fondi a maglie per evitare il contatto di ticks wiAcqua contaminata con urine e feci di topi.

Introduction

Le zecche sono obbligati ectoparassiti ematofagi dei vertebrati e sono distribuiti in tutto il mondo. Negli Stati Uniti, almeno 11 specie di zecche sono vettori di agenti patogeni di importanza per la salute pubblica 1. Ixodes scapularis è responsabile per la trasmissione di diversi agenti patogeni come gli agenti causali della malattia di Lyme (Borrelia burgdorferi) febbre ricorrente (B. miyamotoi), anaplasmosi granulocitica umana (Anaplasma phagocytophilum), e babesiosi (Babesia spp.). Nonostante l'importanza di I. scapularis come vettori di malattie, la raccolta di questi aracnidi in abbondanza in natura per gli studi in laboratorio non è sempre fattibile. Pertanto, la produzione di zecche allevate in laboratorio sano è essenziale per gli studi di biologia tick, tick e-patogeno interazioni.

Il ciclo di vita di tutte le zecche dure (famiglia Ixodidae), tra cui I. scapularis, è costituito da l'uovo e tre activE stadi: larva, ninfa e adulti. Ogni fase attiva viene alimentata da un host vertebrato. Le complesse interazioni che si verificano tra zecche e loro ospiti durante diversi giorni di attacco e di alimentazione sono quasi impossibili da replicare usando mangimi artificiali e sono improbabili che forniscono un numero sufficiente di zecche alimentate per l'allevamento di massa 2 , 3 , 4 . Pertanto, i topi e conigli vivi vengono utilizzati più frequentemente come host per l'allevamento di immaturi (larve e ninfe), e fasi mature (adulti) di zecche, rispettivamente. Il requisito di ospedali multipli per l'alimentazione del sangue durante ogni fase di sviluppo complica l'allattamento dei ticchetti e è tempo e costi intensivi 5 , 6 , 7 . La maggior parte dei protocolli per l'allevamento del ticchettio richiede la conservazione dei topi in una gabbia a pavimento griglia metallica sospesa 7 , 8 o in un cilindro caGe di tali dimensioni che l'animale non può muoversi liberamente e lo sposo stesso 6 , 9 , 10 .

Queste gabbie cilindriche vengono successivamente trasferite in una gabbia di scarpiere con una griglia metallica. Quindi vengono raccolti le zecche ad anello incastrate e smontate. Tuttavia, questo metodo consente di esporre le zecche alimentate ad acqua contaminata da urine e feci che possono aumentare la crescita delle funghi e la mortalità dei segni. Inoltre, aumenta la possibilità di fuggire dal bacino dell'acqua, oltre che causare stress ai topi. Per aggirare questi problemi, qui dimostriamo che la tambura di larvale è alimentata su topi all'interno di gabbie monouso di tipo plastic shoebox. Questo metodo consente il normale comportamento dei topi, aumenta il recupero ingorgo del ticchettio e diminuisce la mortalità dei segni a causa della contaminazione.

Protocol

Il protocollo (Number-00682) descritto qui di seguito è stato approvato dal Comitato Istituzionale cura degli animali ed uso (IACUC) presso l'Università del Nevada Reno e segue le linee guida della University of Nevada, animale comitato etico della ricerca di Reno. In breve, i topi sono stati anestetizzati con isoflurano e un'ogiva è stato utilizzato per mantenere livelli isoflurano continui per 20 min. Un unguento veterinario è stato usato per l'essiccamento della occhi sotto anestesia. Toe pinch stata …

Representative Results

Abbiamo modificato i protocolli 6 , 10 per l'allevamento dei tick , per migliorare l'efficienza di alimentazione e ridurre lo stress sull'host del mouse. I risultati dimostrano che le gabbie di mouse standard in stile shoebox sono adatte per l'allevamento dei ticchetti. La biancheria bianca forniva un buon contrasto per una facile raccolta di zecche alimentate. La maggior parte delle zecche si sono arra…

Discussion

Passi critici all'interno del protocollo

È importante avere diversi livelli di misure di sicurezza durante l'allevamento delle zecche per evitare fuga accidentale. L'uso di nastro adesivo e fossato d'acqua sono fondamentali per garantire la sicurezza. È importante mantenere il mouse anestetizzato su un tappetino per mantenere costante la temperatura corporea. Abbiamo anche scoperto che la rasatura del mouse non fornisce alcun vantaggio in più per l'attaccatura del tick. U…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

The authors acknowledge the help from the staff of Laboratory Animal Medicine, University of Nevada, Reno. MM received funding from Nevada INBRE.

Materials

Puralube vet ointment Amazon Available from any Pet store or online store
Disposable mouse cage  Innovive, San Diego, CA  MV 2 Set of bottom and lid
White Alpha dri bedding  Lab Supply, Fort Worth, TX  ALPHA-Dri™

References

  1. Gleim, E. R., et al. Factors associated with tick bites and pathogen prevalence in ticks parasitizing humans in Georgia, USA. Parasites &amp; Vectors. 9 (125), 1-13 (2016).
  2. Krober, T., Guerin, P. M. In vitro feeding assays for hard ticks. Trends Parasitol. 23 (9), 445-449 (2007).
  3. Kuhnert, F. Feeding of Hard Ticks In Vitro: New Perspectives for Rearing and for the Identification of Systemic Acaricides. ALTEX. 13 (2), 76-87 (1996).
  4. Voigt, W. P., et al. In vitro feeding of instars of the ixodid tick Amblyomma variegaturn on skin membranes and its application to the transmission of Theileria mutans and Cowdria ruminantium. Parasitol. 107, 257-263 (1993).
  5. Gregson, J. D., Smith, C. N. Ticks. Insect Colonization and Mass Production. , 49-72 (1966).
  6. Sonenshine, D. E. . Biology of Ticks. 2, (1993).
  7. Bouchard, K. R., Wikel, S. K., Marquaedt, W. C. Care, maintenance, and experimental infestation of ticks in the laboratory setting. Biology of Disease Vectors. , 705-711 (2005).
  8. Schumaker, T. S., Barros, D. M. Life cycle of Ornithodoros (Alectorobius) talaje. (Acari:Argasidae) in laboratory. J Med Entomol. 32, 249-254 (1995).
  9. Banks, C. W., Oliver, J. H., Hopla, C. E., Dotson, E. M. Laboratory life cycle of Ixodes woodi (Acari:Ixodidae). J. Med. Entomol. 35, 177-179 (1998).
  10. James, A. M., Oliver, J. H. Feeding and host preference of immature Ixodes dammini,I.scapularis,and I.pacificus.(Acari:Ixodidae). J. Med. Entomol. 27, 324-330 (1990).

Play Video

Cite This Article
Nuss, A. B., Mathew, M. G., Gulia-Nuss, M. Rearing Ixodes scapularis, the Black-legged Tick: Feeding Immature Stages on Mice. J. Vis. Exp. (123), e55286, doi:10.3791/55286 (2017).

View Video