¿Quién es quién? Métodos no invasivos para Individualmente Sexuales y Mark altriciales Chicks
Summary
Este protocolo proporciona un conjunto práctico de los métodos, que permite extremadamente rápido, fácil, no invasivo, confiable y de bajo costo, la determinación del sexo molecular de las aves y su no invasivo, rápido, seguro y fácil de reconocer que marca poco después de la eclosión. Sólo se requiere un limitado manejo de los pollitos. Esta caja de herramientas práctica de métodos cumple en su totalidad con las RRR-directrices.
Abstract
Muchos experimentos requieren la determinación temprana del sexo de la descendencia, así como principios de marcado de los recién nacidos para el reconocimiento individual. De acuerdo con las directrices de bienestar animal, las técnicas no invasivas se debe preferir siempre que sea aplicable. En nuestro grupo, trabajamos en diferentes especies de aves de la canción en el laboratorio y en el campo, y la aplicamos con éxito métodos no invasivos para el sexo e individualmente marcamos polluelos. Este artículo presenta una caja de herramientas no invasivas integral. Sexing aves antes de la expresión de características sexuales secundarias requiere la colección de material de ADN-cojinete para la PCR. Hemos establecido un método rápido y fácil de las aves del sexo de cualquier edad (post eclosión) mediante la extracción de ADN a partir de hisopos bucales. Los resultados se pueden obtener dentro de 3 horas. Por abajo plumas de pollo marcado individuo se recortan en los patrones preestablecidos que permiten una rápida identificación en el orden de eclosión. Este conjunto de métodos de fácil aplicación en un laboratorio equipado de serie y especialmente adecuado para WorkinSe requiere g en el campo como ningún equipo especial para el muestreo y el almacenamiento. Manejo de los pollos se reduce al mínimo y el marcado y sexado son técnicas no invasivas apoyando así la RRR-principio de directrices de bienestar animal.
Introduction
El reconocimiento individual, sexaje y genotipado son requisitos fundamentales en una variedad de estudios experimentales. La obtención de material para cojinetes de ADN y marcado sujetos sin ambigüedad (incluso a una edad temprana) debe tener un mínimo impacto en la fisiología, el comportamiento y la supervivencia. Siempre que sea posible, los procedimientos invasivos deberían evitarse de acuerdo con el principio RRR 1.
Los métodos no invasivos no sólo son beneficiosos para el animal, pero también pueden mejorar los datos obtenidos como animales se ven menos afectadas por los tratamientos.
En las aves, la determinación del sexo de ADN se puede realizar en un número de materiales que se pueden obtener de forma no invasiva como excrementos de 2, 3,4 plumas o hisopos bucales 3,5,9. Independientemente de la condición y edad hisopos bucales del sujeto son el método de elección para el sexaje aviar, ya que son fáciles de realizar, rara vez fallan y la manipulación es corto.
Hasta el momento, el ADN de los hisopos bucalesse extrajo bien con los kits disponibles en el mercado 3,6 o que consumen tiempo protocolos de extracción de ADN convencionales 3,6-8. Kits no sólo son bastante caros, pero sus protocolos pueden imponer desafíos para el trabajo de campo. Algunos detalles de procedimiento, por ejemplo, el secado y la incubación de las muestras, no son prácticos en el campo. Especialmente en un entorno donde los protocolos experimentales requieren tratamiento depende del sexo ya desde unos pocos minutos después de la eclosión, se inste a un método rápido, no invasivo, confiable y fácil de obtener resultados.
Al otro lado de la taxa de aves una caja de herramientas considerable para las personas que marcan ha desarrollado 10. La amplia gama de técnicas disponibles da cuenta de la variedad de objetivos de la investigación, las especies y los presupuestos. Sin embargo, marcado de los pequeños polluelos se ha enfrentado a los investigadores con los retos adicionales. En algunas especies (por ejemplo, paseriformes) pollitos son demasiado pequeños para aplicar en las patas y requieren de procedimientos alternativos, queno alterar el comportamiento de padres y crías. Mientras que el conocimiento y el interés en la mejora del bienestar y de las técnicas en los estudios de campo y de laboratorio de los animales es cada vez mayor, el uso de técnicas no invasivas es altamente recomendable y preferible.
Este protocolo proporciona un método no invasivo, rápido, fácil de reconocer y persistente para marcar individualmente pollos muy jóvenes, antes de aplicar bandas para las piernas es factible. Este método de marcado se introduce en una de las más importantes especies modelo de laboratorio de aves, el pinzón de cebra (Taeniopygia guttata) 11-13. El protocolo se cumplan todos los objetivos previamente publicados para técnicas de marcado individuales 10 y ya ha sido aplicado con éxito 14,15.
Protocol
Representative Results
Discussion
Sexado de hisopos bucales usando Chelex mostró una muy alta tasa de éxito. Plumón de corte de crías permitieron la diferenciación entre los pichones hasta que las bandas de la pierna era posible.
Extracción Chelex-ADN de hisopo bucal produjo suficiente ADN para llevar a cabo con éxito el sexado molecular. La determinación del sexo fue de 100% correcto como validado por el plumaje presenta dimorfismo sexual. La tasa de éxito reportado aquí es muy superior a la reportada por dos estu…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Muchas gracias a Silke Kipper, Sarah Kiefer, Michael Weiß, Conny Bartsch y Silke Voigt-Heucke para la recolección de la muestra entusiasta en el campo, a Janett Birkenfeld para la asistencia continuada, a Ulla Kobalz por las hermosas geles y Tobias Krause como apoyo moral.
Materials
| Whatman 3MM Chromatography paper | e.g. Fisher Scientific | No.:3030-153 | |
| Chelex 100 Resin | Biorad | #143-2832 | |
| Taq polymerase | addgene | http://www.addgene.org/25712/ | |
| leg band (Flexi number rings for birds, diameter 2,5 mm) | Horst Stengel & Sohn |
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