누구는 누구입니까? 비 침습적 인 방법 개별적으로 섹스와 마크 Altricial 병아리
Summary
이 프로토콜은 매우 빠르고, 쉽고, 비 침습, 신뢰성과 저비용 수 방법의 편리한 세트, 조류의 분자 성 결정과 자신의 비 침습, 빠르고, 안전하고 쉽게 알아볼 곧 부화 후 마킹을 제공합니다. 병아리의 제한된 처리가 필요합니다. 방법이 편리한 도구는 RRR-지침을 완전히 준수합니다.
Abstract
대부분의 실험은 초기 자손의 성별을 결정뿐만 아니라 초기에 개별 인정 신생아의 표시를 필요로합니다. 적용 할 때마다 동물 복지 가이드 라인에 따르면, 비 침습 기술을 선호한다. 우리 그룹에서, 우리는 실험실과 현장에서 노래 조류의 종에서 작동하고, 우리는 성공적으로 섹스에 비 침습적 인 방법을 적용하고 개별적으로 병아리를 표시합니다. 이 문서는 포괄적 인 비 침습 도구 상자를 제공합니다. 새를 Sexing하기 전에 보조 성적 특성의 발현을 PCR을위한 DNA 함유 물질의 수집이 필요합니다. 우리는 구강 면봉의 DNA를 추출하여 모든 연령 (포스트 부화)의 성 조류에 빠르고 쉬운 방법을 설립했다. 결과, 3 시간 내에 얻을 수있다. 개별 표시 병아리의 다운 깃털이 부화 순서 내에서 빠른 식별을 허용하는 특정 패턴으로 트리밍됩니다하십시오. 방법의이 세트는 표준 장비 실험실에서 쉽게 적용 가능하며 일하고에 특히 적합특별한 장비와 같은 분야에서 G는 샘플링과 저장을 위해 필요합니다. 병아리의 취급을 최소화하고 표시 및 sexing 기술함으로써 동물 복지 가이드 라인의 RRR 원리를 지원하는 비 침습된다.
Introduction
개별 인식, sexing과 유전자형이 실험 연구의 다양한 기본 전제 조건이다. DNA 베어링 재료를 얻기 및 (심지어 어린 나이에) 명확하게 주제를 표시하는 생리, 행동, 그리고 생존에 미치는 영향을 최소화해야한다. 가능하면, 침략적인 절차는 RRR 원칙 1에 따라 피해야한다.
비 침습적 인 방법뿐만 아니라 동물에 대한 도움이됩니다뿐만 아니라 동물이 적은 치료에 의해 영향으로 얻어진 데이터를 향상시킬 수 있습니다.
조류, DNA의 sexing는 배설물이, 깃털 3,4 또는 구강 면봉 3,5,9와 같은 비 침습적으로 얻을 수있는 재료의 수에 수행 할 수 있습니다. 그들이 수행 쉽기 때문에 상관없이 피사체의 상태와 연령 구강 면봉의 조류 sexing에 대한 선택의 방법은 거의 실패하지 않습니다 및 취급이 짧고,,입니다.
구강 면봉 지금까지 DNA시판 키트 3,6 또는 시간 표준 DNA 추출 프로토콜 3,6-8 소모로 추출 하였다. 장비뿐만 아니라 오히려 비싸지 만, 자신의 프로토콜은 현장 작업을위한 과제를 부과 할 수 있습니다. 일부 세부 절차, 예를 들면 건조 및 샘플의 배양은, 현장에서 실제 없습니다. 특히 실험 프로토콜이 이미 몇 분 후 부화로에서 섹스 의존 치료를 필요로 설정의 결과를 얻을 수있는, 빠르고 비 침습적, 믿을 수있는 쉬운 방법을 촉구있다.
조류 분류군에 걸쳐 표시 개인을위한 많은 도구 상자 (10)를 개발하고있다. 사용 가능한 기술의 광범위한 연구의 목적, 종류 및 예산의 다양한 차지한다. 그러나, 작은는 nestlings를 표시하는 추가 과제와 연구자를 직면하고있다. 어떤 종에서 (예를 들면 passerines) 병아리 다리 밴드를 적용하기에 너무 작고 다른 방법을 필요로하는부모 – 자식의 동작을 변경하지 않습니다. 인식과 동물 복지 현장 및 실험실 연구에서 기술 향상에 대한 관심이 증가함에 따라, 비 침습 기술의 사용을 강력하게 권장하고 바람직하다.
이 프로토콜은 개별적으로 다리 밴드를 적용하기 전에 아주 어린는 nestlings를 표시하는 비 침습, 빠르고, 쉽게 인식하고 지속적인 방법을 제공하는 것은 가능하다. 이 표시 방법은 가장 중요한 조류 실험실 모델 종 중 하나, 얼룩말 핀치 (Taeniopygia의 guttata) 11 ~ 13에 도입된다. 이 프로토콜은 개별 마킹 기술 10 이전에 게시 된 모든 목적을 준수하며 이미 성공적으로 14, 15을 적용하고있다.
Protocol
Representative Results
Discussion
Chelex를 이용한 구강 면봉 Sexing는 매우 높은 성공률을 나타내었다. 다리 밴딩이 가능해질 때까지 절단 해츨링의 다운 깃털는 nestlings 사이에 차별화를 가능하게했다.
구강 면봉 Chelex-DNA 추출이 성공적 분자 sexing을 수행하기에 충분한 DNA를 얻었다. 성별 결정은 성적으로 동종 이형의 깃털에 의해 확인으로 100 % 정확했다. 여기에보고 성공률이 이전의 연구에서보고 된 7,9</sup…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
도덕적 지원을위한 아름다운 젤과 토비아스 크라우스 울라 Kobalz에 계속 지원을위한 Janett Birkenfeld에 현장에서 열정적 인 시료 채취에 대한 실케 키퍼, 사라 키퍼, 마이클 와이즈, 코니 BARTSCH 및 실케 보이트 – Heucke에 많은 감사.
Materials
| Whatman 3MM Chromatography paper | e.g. Fisher Scientific | No.:3030-153 | |
| Chelex 100 Resin | Biorad | #143-2832 | |
| Taq polymerase | addgene | http://www.addgene.org/25712/ | |
| leg band (Flexi number rings for birds, diameter 2,5 mm) | Horst Stengel & Sohn |
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