Quem é Quem? Métodos não-invasivos para Individualmente Sexo e Mark altriciais Chicks
Summary
Este protocolo fornece um conjunto conveniente de métodos, que permite extremamente rápido, fácil, não-invasivo, confiável e de baixo custo, a determinação do sexo molecular de aves e sua não-invasivo, rápido, seguro e facilmente reconhecível marcando logo após a eclosão. É necessária apenas a manipulação limitado de pintos. Esta caixa de ferramentas conveniente de métodos cumpre totalmente com as diretrizes-RRR.
Abstract
Muitos experimentos exigem determinação precoce do sexo do filho, bem como início de marcação de recém-nascidos para o reconhecimento individual. De acordo com as diretrizes de bem-estar animal, devem ser preferidos sempre que aplicável técnicas não invasivas. Em nosso grupo, nós trabalhamos em diferentes espécies de pássaros da canção no laboratório e no campo, e aplicar com êxito métodos não-invasivos para sexo e individualmente marcar pintos. Este trabalho apresenta uma abrangente ferramenta de caixa não-invasiva. Sexagem aves antes da expressão de características sexuais secundárias exige a coleta de material de suporte de DNA para PCR. Nós estabelecemos um método rápido e fácil para as aves do sexo de qualquer idade (pós eclosão) por extração de DNA a partir de zaragatoas bucais. Os resultados podem ser obtidos em 3 horas. Por baixo do bico penas marcação indivíduo são cortados em padrões específicos que permitam identificar rapidamente dentro da ordem de eclosão. Este conjunto de métodos é facilmente aplicável em um laboratório padrão equipada e especialmente adequado para trabalhandog no campo como nenhum equipamento especial é necessário para a amostragem e armazenamento. Manipulação de pintos é minimizado e técnicas de marcação e sexagem não são invasivos apoiando assim o RRR-princípio de diretrizes de bem-estar animal.
Introduction
O reconhecimento individual, sexagem e genotipagem são pré-requisitos fundamentais em uma variedade de estudos experimentais. Obtenção de material com DNA e marcação assuntos de forma inequívoca (mesmo em tenra idade) deve ter um impacto mínimo sobre a fisiologia, comportamento e sobrevivência. Sempre que possível, os procedimentos invasivos deve ser evitada de acordo com o princípio da RRR 1.
Os métodos não-invasivos não são apenas benéfico para o animal, mas também pode melhorar os dados obtidos como os animais são menos afetadas pelos tratamentos.
Nas aves, sexagem de DNA pode ser executada em uma série de materiais obtidos não invasiva como excrementos 2, 3,4 ou penas zaragatoas bucais 3,5,9. Independentemente do estado e idade swabs bucais do sujeito são o método de escolha para a sexagem das aves, porque são fáceis de executar, raramente falham e manuseio é curto.
Até agora, o DNA de swabs bucaisou foi extraído com kits disponíveis no mercado 3,6 ou demoradas protocolos de extração de DNA padrão 3,6-8. Kits não são apenas um pouco caro, mas os protocolos podem impor desafios para o trabalho de campo. Alguns detalhes do procedimento, por exemplo, de secagem e de incubação de amostras, não são práticos na área. Especialmente em um ambiente onde protocolos experimentais requerem tratamento dependente sexo já a partir de alguns minutos após a eclosão, há exortar por um método rápido, não-invasivo, confiável e fácil de obter resultados.
Do outro lado da taxa aviária uma caixa de ferramentas considerável para os indivíduos de marcação foi desenvolvido 10. A grande variedade de técnicas disponíveis explica a variedade de objetivos de pesquisa, espécies e orçamentos. No entanto, a marcação das pequenas filhotes confrontou pesquisadores com desafios adicionais. Em algumas espécies (por exemplo, passerines) pintos são demasiado pequena para aplicar bandas de perna e requerem métodos alternativos, quenão alteram o comportamento de pais e filhos. Enquanto a consciência e interesse em melhorar o bem-estar e técnicas em estudos de campo e de laboratório animais está crescendo, o uso de técnicas não-invasivas é fortemente encorajado e preferencial.
Este protocolo fornece um método não-invasivo, rápido e facilmente reconhecível e persistente para marcar individualmente muito jovens filhotes antes de aplicar bandas de perna é viável. Este método de marcação é introduzido em uma das espécies de aves modelo de laboratório mais importantes, a Zebra Finch (Taeniopygia guttata) 11-13. O protocolo em conformidade com todos os objectivos previamente publicados para as técnicas de marcação individuais 10 e já foi aplicada com êxito 14,15.
Protocol
Representative Results
Discussion
Sexagem de zaragatoas bucais utilizando Chelex mostrou um alto índice de sucesso. Para baixo penas de corte do hatchling permitiu a diferenciação entre filhotes até que a perna bandas era possível.
Extração Chelex-DNA a partir de zaragatoas bucais rendeu DNA suficiente para realizar com êxito a sexagem molecular. A determinação do sexo foi de 100% correta, conforme validado pela plumagem dimorfismo sexual. A taxa de sucesso relatado aqui é significativamente maior do que a taxa re…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Muito obrigado a Silke Kipper, Sarah Kiefer, Michael Weiss, Conny Bartsch e Silke Voigt-Heucke para coleta de amostras entusiasmado no campo, para Janett Birkenfeld de assistência continuada, para Ulla Kobalz para as belas géis e Tobias Krause para dar apoio moral.
Materials
| Whatman 3MM Chromatography paper | e.g. Fisher Scientific | No.:3030-153 | |
| Chelex 100 Resin | Biorad | #143-2832 | |
| Taq polymerase | addgene | http://www.addgene.org/25712/ | |
| leg band (Flexi number rings for birds, diameter 2,5 mm) | Horst Stengel & Sohn |
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