من هو من؟ طرق غير الغازية إلى الجنس بشكل فردي ومارك Altricial الفراخ
Summary
يوفر هذا البروتوكول مجموعة مريحة من الأساليب، والتي تمكن سريع للغاية، وسهلة وغير الغازية وموثوقة ومنخفضة التكلفة، وتحديد الجنس الجزيئية من الطيور وعلى غير الغازية، سريعة وآمنة ويمكن التعرف عليها بسهولة بمناسبة بعد وقت قصير من الفقس. مطلوب فقط معالجة محدودة من الكتاكيت. هذه الأدوات ملائمة لأساليب يتوافق تماما مع المبادئ التوجيهية-RRR.
Abstract
العديد من التجارب تتطلب تحديد النسل في وقت مبكر من الجنس وكذلك وضع العلامات المبكرة لحديثي الولادة للاعتراف الفردية. وفقا للمبادئ التوجيهية الرفق بالحيوان، ينبغي تفضيل تقنيات غير الغازية متى شاءت. في مجموعتنا، ونحن نعمل على أنواع مختلفة من الطيور الأغنية في المختبر أو في الميدان، ونجحنا في تطبيق أساليب غير الغازية لممارسة الجنس وبشكل فردي بمناسبة الكتاكيت. تعرض هذه الورقة غير الغازية أداة مربع شاملة. تلفيق الطيور قبل التعبير عن الصفات الجنسية الثانوية يتطلب جمع المواد DNA الحاملة للPCR. أنشأنا طريقة سريعة وسهلة للطيور الجنس في أي عمر (آخر الفقس) عن طريق استخراج الحمض النووي من مسحات الشدق. ويمكن الحصول على نتائج في غضون 3 ساعات. ليتم قطع الريش أسفل الفردية فرخ وسم في أنماط محددة تسمح بتحديد سريع داخل النظام الفقس. هذه مجموعة من الأساليب ينطبق بسهولة في المختبر القياسية مجهزة ومناسبة خاصة لركينمطلوب ز في الميدان وعدم وجود معدات خاصة لأخذ العينات والتخزين. يتم التقليل من التعامل مع الدجاج ووضع العلامات وتلفيق تقنيات غير الغازية مما يدعم RRR-مبدأ من المبادئ التوجيهية رعاية الحيوان.
Introduction
الاعتراف الفردي، [سإكسينغ والتنميط الجيني هي الشروط الأساسية في مجموعة متنوعة من الدراسات التجريبية. وينبغي الحصول على الحمض النووي والمواد التي تحمل العلامات المواضيع لا لبس فيه (حتى في سن مبكرة) لها تأثير ضئيل على علم وظائف الأعضاء والسلوك، والبقاء على قيد الحياة. كلما كان ذلك ممكنا، وينبغي تجنب الإجراءات الغازية وفقا لمبدأ RRR 1.
أساليب غير الغازية ليست فقط مفيدة للحيوان ولكن أيضا قد تؤدي إلى تحسين البيانات التي تم الحصول عليها كما هي أقل تأثرا من الحيوانات العلاجات.
في الطيور، [سإكسينغ الحمض النووي لا يمكن أن يؤديها على عدد من المواد التي يمكن الحصول عليها غير جراحية مثل فضلات 2، 3،4 الريش أو مسحات الشدق 3،5،9. بغض النظر عن حالة والعمر مسحات الشدق الموضوع هي الأسلوب المفضل ل[سإكسينغ الطيور، لأنها سهلة لتنفيذ، ونادرا ما تفشل والمناولة قصيرة.
حتى الآن، والحمض النووي من مسحات الشدقتم استخراج إما مع مجموعات المتاحة تجاريا 3،6 أو مضيعة للوقت قياسي بروتوكولات استخراج الحمض النووي 3،6-8. مجموعات ليست فقط مكلفة نوعا ما، ولكن يمكن بروتوكولاتها تفرض تحديات للعمل الميداني. بعض التفاصيل الإجرائية، مثل التجفيف وحضانة العينات، ليست عملية في هذا المجال. خصوصا في وضع حيث تتطلب البروتوكولات التجريبية الجنس العلاج تعتمد في وقت مبكر من بضع دقائق الفقس آخر، هناك حث للطريقة سريعة وغير الغازية وموثوقة وسهلة للحصول على نتائج.
عبر أصناف الطيور وقد تم تطوير مجموعة أدوات كبيرة للأفراد بمناسبة 10. مجموعة واسعة من التقنيات المتاحة لحسابات متنوعة من أهداف البحث والأنواع والميزانيات. ومع ذلك، بمناسبة الصقور الصغيرة صغيرة واجهت الباحثين مع تحديات إضافية. في بعض الأنواع (مثل العصفوريات) فراخ صغيرة جدا لتطبيق نطاقات الساق وتتطلب طرق بديلة، والتيلا تغير سلوك الآباء والأبناء. كما الوعي والاهتمام في تحسين الرفاهية والتقنيات في الدراسات الميدانية والمختبرية الحيوان ينمو، واستخدام تقنيات غير الغازية ويشجع بقوة وفضل.
يوفر هذا البروتوكول لذلك، طريقة سريعة، يمكن التعرف عليها بسهولة ومستمرة غير الغازية للاحتفال بشكل فردي الصقور الصغيرة مبكرة جدا قبل تطبيق نطاقات الساق هو ممكن عمليا. يتم إدخال هذه الطريقة لوضع علامات على واحدة من أهم الأنواع نموذج مختبر الطيور، زيبرا فينش (Taeniopygia الرقشاء) 11-13. بروتوكول يتوافق مع جميع الأهداف التي تم نشرها مسبقا لتقنيات بمناسبة الفردية 10 وتم تطبيقه بالفعل بنجاح 14،15.
Protocol
Representative Results
Discussion
تلفيق من مسحات الشدق باستخدام Chelex أظهرت نسبة نجاح عالية للغاية. الريش أسفل قطع فقس البيض لتمكين التفريق بين الصقور الصغيرة حتى كان ربط الساق ممكن.
استخراج الحمض النووي من Chelex مسحات الشدق أسفرت عن الحمض النووي كافية لتنفيذ [سإكسين…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
شكرا جزيلا لسيلك كيبر سارة كيفر، مايكل فايس، كوني بارتش وسيلكه فويت-Heucke لجمع العينات حماسا في الميدان، لJanett في Birkenfeld عن المساعدة المستمرة، إلى العلا Kobalz عن المواد الهلامية جميلة وتوبياس كراوس عن الدعم المعنوي.
Materials
| Whatman 3MM Chromatography paper | e.g. Fisher Scientific | No.:3030-153 | |
| Chelex 100 Resin | Biorad | #143-2832 | |
| Taq polymerase | addgene | http://www.addgene.org/25712/ | |
| leg band (Flexi number rings for birds, diameter 2,5 mm) | Horst Stengel & Sohn |
References
- Russell, W. M. S., Burch, R. L. The principles of humane experimental technique. , (1959).
- Robertson, B. C., et al. Molecular sexing of individual kakapo, Strigops habroptilus Aves, from feces. Mol. Ecol. 8, 1349-1350 (1999).
- Yannic, G., et al. Description of microsatellite markers and genotyping performances using feathers and buccal swabs for the Ivory gull (Pagophila eburnea). Mol. Ecol. Resour. 11, 877-889 (2011).
- Bello, N., et al. Isolation of genomic DNA from feathers. J. Vet. Diagn. Invest. 13, 162-164 (2001).
- Handel, C. M., et al. Use of buccal swabs for sampling DNA from nestling and adult birds. Wildl. Soc. Bull. 34, 1094-1100 (2006).
- Brubaker, J. L., et al. A noninvasive, direct real-time PCR method for sex determination in multiple avian species. Mol. Ecol. Resour. 11, 415-417 (2011).
- Arima, H., Ohnishi, N. Usefulness of avian buccal cells for molecular sexing. Ornithological Science. 5, 139-143 (2006).
- Seki, S. -. I. Molecular sexing of individual Ryukyu Robins Erithacus komadori using buccal cells as a non-invasive source of DNA. Ornithological Science. 2, 135-137 (2003).
- Wellbrock, A. H. J., et al. Buccal swabs as a reliable source of DNA for sexing young and adult Common Swifts (Apus apus). J. Ornithol. 153, 991-994 (2012).
- Marion, W. R., Shamis, J. D. Annotated-Bibliography of Bird Marking Techniques. Bird Banding. 48, 42-61 (1977).
- Scharff, C., Adam, I. Neurogenetics of birdsong. Curr. Opin. Neurobiol. , (2012).
- Griffith, S. C., Buchanan, K. L. The Zebra Finch: the ultimate Australian supermodel. Emu. 110, 5-12 (2010).
- Fee, M. S., Scharff, C. The songbird as a model for the generation and learning of complex sequential behaviors. Ilar J. 51, 362-377 (2010).
- Honarmand, M., et al. Stressful dieting: nutritional conditions but not compensatory growth elevate corticosterone levels in zebra finch nestlings and fledglings. PLoS On. 5, (1371).
- Krause, E. T., et al. Zebra finch nestlings beg more under better nutritional conditions. Behaviour. 148, 1239-1255 (2011).
- Griffiths, R., et al. A DNA test to sex most birds. Mol. Ecol. 7, 1071-1075 (1998).
- Pluthero, F. G. Rapid purification of high-activity Taq DNA polymerase. Nucleic Acids Res. 21, 4850-4851 (1993).
- . Joint Working Group on Refinement. Laboratory birds: refinements in husbandry and procedures. Fifth report of BVAAWF/FRAME/RSPCA/UFAW Joint Working Group on Refinement. Lab Anim. 35, 1-163 (2001).
