Quellung 반응은 폐렴 구균 혈청 형을위한 황금 표준 기술이다.이 기술은 현미경 특정 폐렴 구균 항혈청을 이용하여 일반적으로 세계 기준과 연구 실험실에서 사용된다.
폐렴 구균의 90 가지 캡슐 혈청 형 (폐렴 구균)가있다. 뿐만 아니라 폐렴 역학을 이해하기위한 도구 것으로, 캡슐 혈청 형 백신의 효능과 효과 연구를위한 유용한 정보를 제공 할 수 있습니다. Quellung 반응은 폐렴 구균 캡슐 혈청 형에 대한 황금 표준 방법입니다. 방법은 캡슐 형 다당류에 대한 감독 모으고 특정 항혈청과 폐렴 구균 세포 현탁액을 테스트하는 것을 포함한다. 항원 항체 반응은 미시적으로 관찰된다. 세균 세포 현탁액 1) 준비, 유리 슬라이드에 세포 및 항혈청의 2) 혼합, 3) 현미경을 사용 Quellung 반응을 읽기 : 프로토콜은 세 가지 주요 단계가 있습니다. Quellung 반응을 수행 할 합리적으로 간단하고 적당한 현미경 및 항혈청을 사용할 수 있습니다 어디든지 적용 할 수있다.
연쇄상 구균 폐렴 (폐렴 구균)는 질병의 부담이 자원이 부족한 국가의 1에 주로 떨어지는, 매년 5 세 미만 약 80 만 어린이의 죽음에 대한 책임이 있습니다. 폐렴 구균 질환은 패혈증, 수막염과 폐렴이 심한 생명을 위협하는 감염으로 급성 중이염과 같은 지역화 감염 정도에 이르기까지 다양합니다. 폐렴 구균의 90 캡슐 혈청 형 3, 4를 설명 하였다. 현재 폐렴 구균 백신은 침습성 질환 (5, 6)의 대부분을 담당하는 혈청 형에 대한 보호 기능을 제공합니다. 그러나, 백신의 광범위한 사용은 비 인두 운송 및 침입 질병 7, 8 두, nonvaccine 혈청 형에 의해 백신에 포함 된 혈청 형의 교체와 관련이있다. 이 역학에 대한 혈청 형의 중요성을 강조감시 및 장기 백신 영향 9 연구.
폐렴 구균 입력을위한 황금 표준 메서드는 먼저 1902 년에 네우 펠드에 의해 기술 된 Quellung 반응으로 알려진 캡슐 반응 시험 (오스트리아 10 참조). 일치의 높은 수준의 실험실 사이, 그리고 Quellung 반응 및 다른 혈청 형의 방법으로 11 ~ 13 사이에서 발견되었습니다. Quellung 반응 10, 14 ~ 16의 몇 가지 변형이 있습니다. 여기서 설명한 방법은 카운터 얼룩이나 오일 침지 렌즈의 사용을 필요로하지 않으며, 오히려, 준비된 시편의 방울 타이핑 혈청과 혼합하고 400X 배율 하에서 즉시 조사했다.
Quellung 반응은 일반적으로 시판되는 항혈청을 사용하여 수행된다. 여기에 설명 된 방법보다 비용 효과적인 만드는 다른 방법 (16, 17)에 비해 적게 항혈청을 이용한다. 일단 ISOL식사는 긍정적 인 반응이 관찰 될 때까지 순차적으로 항혈청 풀 테스트되어, 폐렴으로 확인됩니다. 각 풀 항혈청 91 폐렴 구균 혈청 형 (18)에 대해 제기 항혈청의 다른 혼합물을 포함합니다. 풀이 구축되면, 반응성 풀에 포함 된 개별 타입 및 그룹 항혈청은 순서대로 개별적으로 테스트된다. 그룹 항혈청 (예 : 그룹 22 항혈청은 혈청 형 22F 및 22A와 반응) 특정 그룹의 모든 혈청과 반응하는 반면 형 항혈청은 일반적으로, 하나의 혈청 (예, 타입 1 항혈청은 혈청 형 1과 반응)과 반응. 그룹 내의 일부 혈청 형은 추가 인자 항혈청 (예를 들어 혈청 형 22F는 요소 (22B)와 반응 아니지만 22C)를 사용하여 구별된다. 혈청 형이 (19, 20)을 판정 할 때까지이 경우 테스트는 모든 관련 인자 항혈청으로 계속된다. Quellung 반응은 간단하고 신속 14이며 모든 L로 수행 될 수있다aboratory이는 좋은 품질의 현미경 및 항혈청의 적절한 세트가 장착되어 있습니다.
이 기술에서 중요한 단계는 순수 배양 브로스에 균체의 적절한 수를 더한 함께 현탁액을 제조하는 데 사용되는 약속된다. 그것은 한천 접시에 식민지의 성장과 형태가 다른 폐렴 구균 균주 사이에서 변화 주목해야한다. 일부는 루프를 잡을하고 국물에 잘 유화 없습니다 어려울 수 있습니다 건조하고 거친 식민지를 생산하고 있습니다. 세포 현탁액을 준비 할 때 그 때문에, 박테리아의 큰 청소가 필요할 수있다. 어떤 경우에는, 자신의 상대적인 크기는 항혈청으로 세포에 비교 될 수 있도록 개별 셀, 그리고 골재, 음성 대조군에 첨가 명백한 것이 필수적이다. 또한, 너무 많은 박테리아 세포의 캡슐 항원의 과잉 Quellung 반응 (10)을 억제 할 수 위음성 반응이 발생할 수 있습니다. 이러한 이유로, 최적 셀 밀도 세균 현탁액 (도 1)를 생성하는 것이 중요하다. 지속연금 농축 포르말린 몇 방울을 첨가하여 몇 달 동안 유지 될 수있다. 이것은 쉽게 배치 테스트를 가능하게하고 또한 실험실 취득한 감염의 위험을 감소 국물을 살균, 이것은 독성, 부식성, 발암 성, 민감하고, 가연성 처리 포르말린의 안전 위험, 비교 검토해야하지만. 또, 몇 가지 균주는 포르말린 (데이터는 도시되지 않음)의 존재 하에서 약한 반응을 보여줄 것을 관찰했다.
Quellung 반응은 현미경을 사용하여 검사합니다. 위상차의 사용은 캡슐의 시인성을 향상시킨다. 일부 실험실에서, 반응은 1,000 X 배율 (14, 16)에 기름 침수를 사용하여 볼 수 있습니다. 또한, 일부 실험실은 더 긍정적 인 반응을 10, 16, 22의 가시성을 향상시키기 위해 카운터 얼룩 (메틸렌 블루)를 사용합니다. 여기에 제시된 방법은 석유 나없이 볼mmersion 및 400X 배율 15, 17 세 미만. 이 방법은 빠르고, 간단하고 23 비교적 읽기 쉽다.
그것은 항혈청 및 테스트 절차를 순서에 보장하기 위해 좋은 내부 품질 관리 절차를 유지하는 것이 중요합니다. 외부 품질 보증 프로그램에 참여하는 것은 종종 유용합니다.
폐렴 구균의 혈청 형에 대한 Quellung 반응의 주요 제한은 필요 항혈청의 고비용이다. 그러나이 때문에 각 반응에 사용되는 항혈청의 소량으로 상기 프로토콜에서 최소화된다. 몇 가지 다른 방법은 폐렴 구균 23, 24 혈청 형에 대해 설명 하였다. 그러나 Quellung는 황금 표준 남아 새로운 방법의 개발은 Quellung 반응 (23)에 대한 표준화가 필요합니다. 해당 항혈청을 사용 Quellung 반응은 또한 다른 캡을 식별하고 입력하는 데에 이용 될 수있다ULE 박테리아 (25)을 생산. Quellung 반응이 현재 및 신흥 폐렴 구균 혈청 형의 특성뿐만 아니라, 백신의 효능 및 포가 및 질환에 대한 백신의 장기적인 영향에 대한 정보를 제공하는 수단이다.
The authors have nothing to disclose.
이 작품은 빌과 멜린다 게이츠 재단 (PneuCarriage 프로젝트 그랜트 52099)와 빅토리아 정부의 운영 인프라 지원 프로그램에 의해 지원되었다. 아일린 던 자넷 스트라 칸, 그리고 원고의 중요한 읽기 김 토끼 감사합니다.
Pneumococcus (Neufeld) antisera | SSI Diagnostica | http://www.ssi.dk/ssidiagnostica Bring all antisera to room temperature before use |
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Pneumococcus (Omni) antiserum | SSI Diagnostica | 2438 | Bring all antisera to room temperature before use |
Optical Microscope | Leica Microsystems | Leica DML | |
Calibrated Disposable Inoculating Loops 1 µl | Copan | CD175S01 | |
Horse Blood Agar (HBA) plates | Thermo Fisher Scientific | PP2001 | http://www.thermofisher.com.au/ Bring to room temperature before use |
Heart Infusion (HI) broth | Media Preparation Unit (MPU), The University of Melbourne | 40HIN | Bring to room temperature before use |
Glass microscope slides 76 mm x 26 mm | Lomb Scientific | 7101 | Sharps hazard: Dispose in a biohazard sharps container |
Circular glass coverslips | NeuVitro | GG-5 | |
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*Plates prepared from defibranated sheep blood are suitable but blood plates prepared from citrated blood or human blood are not |